原始研究的文章

前面。Cardiovasc。地中海,2023年2月06
秒。心脏瓣膜疾病
卷9 - 2022 | https://doi.org/10.3389/fcvm.2022.919700

IgG2规则:N-acetyl-β-D-glucosamine-specific IgG2 Th17 / Th1合作可以促进急性风湿性心脏病的发病机理和生物标志物的自身免疫性后遗症酿脓链球菌

Christine a . Kirvan ¹,

希瑟Canini¹,

Susan e . Swedo ²,

哈利山^{3 __},

乔治Veasy³,

大卫Jankelow ^{4 __},

斯坦利Kosanke⁵,

肯特沃德⁶,

燕d .赵⁷,

凯西·阿尔瓦雷斯⁸,

安德里亚亨德里克^{8 __}和

玛德琳•坎宁安(george w . bush) ^{8 *}

¹加州州立大学生物科学系的萨克拉门托,CA,美国
²儿科和发育神经精神病学部门,国立精神卫生研究所,国立卫生研究院,卫生和人类服务部,马里兰州贝塞斯达美国医学博士
³儿科部门、传染病、心脏病学,病理学,犹他大学医学院,美国犹他盐湖城
⁴心脏病,南非约翰内斯堡的威特沃特斯兰德大学
⁵比较医学系,俄克拉荷马大学健康科学中心,美国俄克拉荷马城,好吧,
⁶儿科心脏病分工,俄克拉荷马大学健康科学中心,美国俄克拉荷马城,好吧,
⁷生物统计学和流行病学、俄克拉荷马大学健康科学中心,美国俄克拉荷马城,好吧,
⁸微生物学和免疫学,俄克拉荷马大学健康科学中心,美国俄克拉荷马城,好吧,

前期A组链球菌咽炎是急性风湿热的原因(ARF)风湿性心脏瓣膜病(RHD)和西德汉姆舞蹈病(SC)是主要的表现。在ARF, crossreactive链球菌抗原抗体和T细胞反应,碳水化合物,N-acetyl-β-_D氨基葡萄糖(GlcNAc)和M蛋白,分别通过分子模仿心脏和大脑组织目标。在这个转化人类研究中,我们进一步解决我们的假设关于特定致病体液和细胞免疫机制导致链球菌后遗症在小试点研究。这项研究的目的是(1)更好地理解具体的发病机制在ARF,(2)识别潜在的ARF的早期生物标志物,(3)确定免疫球蛋白G(免疫球蛋白)子类针对GlcNAc immunodominant抗原决定基的碳水化合物,通过与GlcNAc ARF血清免疫球蛋白G的反应,M蛋白,和人类神经细胞(SK-N-SH),(4)确定免疫球蛋白沉积在心脏组织免受RHD子类。在10儿科RHD患者和6与SC儿科患者,血清IgG2子类与GlcNAc反应明显,和杰出的ARF 7儿科患者简单的咽炎。三位儿科患者证明只有polymigrating关节炎,ARF的主要表现和琼斯诊断标准的一部分,缺乏IgG2子类GlcNAc-specific反应性升高。在SC, GlcNAc-specific IgG2子类在脑脊液(CSF)选择性地靶向人类神经细胞以及GlcNAc ELISA。在风湿性心脏炎,IgG2子类优先和强烈存入阀组织(n= 4)尽管IgG1浓度升高和IgG3 RHD血清中检测到A组链球菌M蛋白ELISA。虽然我们人类研究论坛包括一个非常小的有限的样本集,我们的小说研究发现一个强大的IgG2自身抗体反应对GlcNAc RHD SC,针对性的心脏瓣膜和神经细胞。心脏IgG2沉积被确认有一个关联的IL-17A / IFN-γ合作签名RHD显示IgG2沉积和组织细胞浸润同时展示这些细胞因子。GlcNAc-specific IgG2可能是一个重要的自身抗体在初始阶段的A组链球菌后遗症的发病机理,和未来的研究将确定它可以作为生物标志物RHD和SC的风险或ARF的早期诊断。

介绍

急性风湿热(ARF)是一种多系统炎症后遗症的a组链球菌(气)咽炎链球菌抗原引起自身免疫反应在易感个体和目标心脏,大脑,和关节(1- - - - - -3引起风湿性心脏病(RHD),西德汉姆舞蹈病(SC),或polymigrating关节炎。ARF的复兴是在1980年代中期在美国和目前在发展中国家(有增无减4- - - - - -11)。ARF的发病机制并不完全清楚,但被认为是由自身免疫和炎症机制由链球菌感染,分子拟态生成crossreactive自身抗体和T细胞反应中发挥作用在易感主机(临床表现12- - - - - -16)。风湿热的诊断是基于修正琼斯标准包括临床观察以及最近的链球菌感染的证据,确定antistreptococcal抗体的血液,或积极的喉咙文化为A组链球菌(1)。

风湿性心脏病是最严重的ARF的表现和全球收购儿科心脏病的一个主要原因,患者出现心瓣炎或心肌炎(3,17- - - - - -20.)。在RHD,瓣膜病变的发展似乎结果从抗体沉积upregulation血管细胞粘附分子1 (VCAM-1)表面的阀紧随其后的渗透主要CD4 +和CD8 + T淋巴细胞,促进炎症、纤维化和瘢痕的阀门破坏心脏功能(21- - - - - -28)。发现了T细胞从RHD分泌促炎细胞因子,包括IFN-γ和TNFα(16,29日)。RHD患者出现心瓣炎和心脏杂音的特点是二尖瓣和主动脉瓣返流(20.,30.- - - - - -34)。心脏损伤的严重程度与瓣膜介入的程度,和心脏瓣膜损伤可能需要更换(3)。

西德汉姆舞蹈病(SC)的主要神经表现ARF的特点是无意识的动作和神经精神障碍,这可能会在10 - 30%的ARF例(35- - - - - -38)。SC是一种基底神经节神经失调,特点是自身抗体这一目标在基底神经节和激活多巴胺神经元钙/ calmodulin-dependent蛋白质(CaM)激酶二世活动以及酪氨酸羟化酶产量的增加和多巴胺合成和释放在人类神经细胞(14,39,40)。SC患者产生自身抗体识别和信号多巴胺2受体(D2LR),作为生物标志物的障碍(41- - - - - -44)和附带的罕见的自身免疫性精神病(45)。SC派生人类单克隆抗体的表达(mAb) V基因在转基因小鼠多巴胺能神经元变性证明了SC自身抗体靶向腹侧tegumental面积或基底神经节的黑质(40)。

我们的知识有很多空白的阶段,原因RHD和SC。虽然自身免疫和分子拟态的标志a组链球菌后遗症几十年来,有很多其他重要的致病机制,可能导致自身免疫状态同时或阶段产生心脏瓣膜病严重程度和结果。这些机制以及它们如何一起工作和产生疾病尚未完全理解和新的生物标志物识别。链球菌和心脏之间除了模仿,RHD可能造成或加剧了释放从受损组织胶原蛋白(3,46),发展anti-myosin和anti-collagen抗体(47)和胶原蛋白反应性T细胞(48),以及纤维化反应转化生长因子升高beta 1 (TGF-β1)在RHD组织(49)。解释左路二尖瓣与心脏瓣膜损伤,提出了另一种假说表明最初的A组链球菌感染引起炎症信号(TNFα和il - 6)、内皮素基因表达的诱导表观遗传变化和心脏瓣膜间质细胞(49)。表观遗传的启动阀组织和暴露于血流动力学压力归因于transvalvular压力梯度(TVPGs)对瓣膜疾病的发生和发展的必要前提。急性心瓣炎和发展为RHD优先发生在阀门暴露于高TVPGs (49)。阀门通常暴露于高血流动力学压力不仅发展当暴露于高TVPGs RHD的病变特点。TGF-β1信号中扮演着重要角色在启动和维持慢性RHD纤维化负责。这种机制提供了一个解释的优先阀参与东盟地区论坛和RHD复活和瓣膜疾病的进展(49)。二类人类白细胞抗原(HLA)分子倾向提出了影响RHD,和不同HLA等位基因与RHD易感性有关已报告在不同种族人群(50- - - - - -55在C4补充因素),而改变(56),TGF-β1 (49)、甘露糖结合蛋白和货代位点可能致病(13,57)。目前还不清楚如果所有这些因素同时一起工作或者特定的跟随别人。当然,我们知道自身免疫和炎症的疾病会导致纤维化Th17细胞是一个重要的影响。

以前的研究也发现体液机制可能在ARF的发病机制中发挥作用和RHD。高架IgG3-complement C4·莫兰实验室相关蛋白炎症反应明显升高的ARF从新西兰毛利组与正常对照组相比。IgG3响应,指导健壮complement-mediated细胞溶菌作用,是针对特定血清型M蛋白升高。IgG3响应可以从增加由IL-21 T_跳频可能导致大脑和心脏细胞子集crossreactive自身免疫反应对ARF的链球菌M蛋白。感兴趣的,浓度升高IL-21 RHD患者的二尖瓣瓣膜被发现,指示一个潜在的重要作用的细胞因子在a组链球菌后遗症(58)。

我们目前的研究提供了一个更深入的理解ARF的免疫发病机理GlcNAc-specific IgG2是天然气的主要子类直接致病反应在RHD和SC,分离ARF从简单的咽炎不会引起疾病的抗体。此外,我们的研究联系Th17细胞/ IL-17A风湿性心脏炎和演示了IL-17A的巧合和IFN-γIgG2沉积,最显著的免疫球蛋白在RHD派生子类瓣膜组织。同样,从风湿性舞蹈病IgG2出现在CSF公认的人类神经细胞识别病原反应SC, RHD和SC显著和优惠血清IgG2响应识别GlcNAc,占主导地位的集团碳水化合物抗原决定基。Anti-GlcNAc IgG2,相比与其他子类,高度升高,明显的,清楚地分开ARF咽炎。综上所述,我们人类小说的研究结果表明,IgG2可能致病子类在RHD和SC Th17 / Th1细胞合作发挥重要作用在ARF的IgG2的发展。我们人类小说研究支持过去的研究提高免疫反应对集团的碳水化合物被关联到一个瓣膜预后差和替代的结果(59)。

此外,没有为RHD疾病相关的生物标记物。理解和定义新的生物标志物可能用于欠发达的资源设置一直是全球的目标。理解和定义新的生物标志物可能用于欠发达的资源设置一直是全球的目标。我们在此定义一个潜在血清生物标志物可能识别儿童风湿热、风湿性心脏病的风险和潜在的解释对a群链球菌的反应可能导致RHD。重申,我们的假设是一种自身免疫性的发展状态在RHD和SC可能部分源于特定的分泌免疫球蛋白子类针对抗原与碳水化合物通过模仿或半个直接设计和抗体针对组织由特定autoreactive辅助T细胞的子集。Th1细胞及其子集IFN-γ生产促进IgG2 (60- - - - - -62年),针对碳水化合物抗原的免疫球蛋白g子类。决心的IgG2子类存入病变组织可以提供洞察机制的疾病以及链球菌和宿主抗原的性质,促进RHD和SC,他们的区别和分离从简单的链球菌咽炎成为ARF的新的潜在生物标志物和RHD人类。

材料和方法

主题、血清、脑脊液、RHD阀组织和研究设计

样本从病人和健康志愿受试者参与研究协议在俄克拉荷马大学健康科学中心,犹他大学医学院的威特沃特斯兰德大学和美国国立卫生研究院。综述了协议的机构审查委员会(irb)各自的机构,和适当的批准/同意获得之前收集的临床资料和样品。具体来说,研究协议被批准用于人体的研究机构审查委员会在美国国立卫生研究院结合神经科学机构审查委员会的贝塞斯达,医学博士,美国;和俄克拉荷马大学健康科学中心的机构审查委员会保护人类受试者,俄克拉荷马城,美国。在所有的研究中,每个父母和孩子给书面同意或同意,分别调查。父母给书面同意孩子参加(见证了NIMH人类受试者保护小组成员)。所有的孩子7岁及以上给书面同意下参与和6和口头同意。样本消除识别信息和编码的模糊身份和诊断实验室储存或之前装运。所有血清和组织样本以外的俄克拉何马州被坎宁安博士的实验室鉴定之前的收据和病人并不是在任何情况下识别她的实验室。

血液收集ARF患者在诊断时的RHD / SC根据修改后的琼斯标准对每个病人进行了研究。NIMH SC患者收集和诊断,在俄克拉荷马大学医院和RHD患者收集在犹他州ARF的爆发和诊断在犹他大学的医学院和医院和ARF和RHD患者被诊断为俄克拉荷马大学医院。表1描述的患者纳入研究数量包括每种类型的病人的数量、来源、年龄和诊断。琼斯标准中提到的表1。数据也列出数量的患者包括但散点图显示每个病人的直接结果,可以跟随在散点图中所示的结果。

表1

表1。急性风湿热:儿科病人队列^公元前。

RHD、polymigrating关节炎和SC患者评估修改后的琼斯标准及气体文化是积极的或anti-streptolysin O(麻生太郎)积极效价。RHD和polymigrating关节炎血清收集部门的儿科传染病、心脏病,和犹他大学医学院的病理学,盐湖城犹他,美国。SC血清和脑脊液样本收集国家精神卫生研究所。额外的RHD, SC、简单的咽炎和健康对照组血清收集从儿科,分歧的心脏病学和神经学在俄克拉荷马大学健康科学中心。血清是所有儿科病例,ARF血清从8到17岁不等。所有血清或脑脊液样本收集后存储在−135°C,直到测试在我们的化验。

阀标本中获得手术或尸检风湿性心脏病患者从4威特沃特斯兰德大学的南非约翰内斯堡。病人年龄从8到15岁。风湿性瓣膜比较解剖和功能正常二尖瓣瓣膜的解剖中年心肌梗死后个人。

组织学

检查hematoxylin-eosin(圆))彩色部分是根据细胞浸润为特征,纤维化(疤痕),新血管形成和矿化的阀门。选定的心脏组织的慢性心瓣炎的证据,由炎症细胞浸润的单核细胞和中性粒细胞与疤痕,新血管形成,缺乏明显的矿化。

细胞系

人类SK-N-SH(写明ATCC HTB-11)神经母细胞瘤行获得了来自美国文化集合类型。细胞常规培养与F12-DMEM (Gibco-BRL)媒体含10%胎牛血清(FCS)、青霉素和链霉素,1%和0.1%庆大霉素在37°C, 5%的公司₂。

免疫组织化学

心脏组织和石蜡生产幻灯片包含嵌入式5-μm组织部分。组织部分在3:1混合deparaffinized Hemo-D:二甲苯和水化在PBS分级乙醇和洗5分钟。细胞因子的研究组织,deparaffinized部分受到抗原检索使用柠檬酸缓冲(10毫米柠檬酸缓冲,pH值6.0 20分钟的热蒸汽)(63年)。在PBS部分被洗了三分钟,阻止蛋白质拦截器(BioGenex) 1:10在蒸馏水稀释5%牛血清白蛋白;探讨了山羊反IL-17A, anti-IFN-γ,或同形像控制在15μg /毫升(研发系统,明尼阿波利斯,美国)一夜之间在4°C。隔夜孵化后,幻灯片在PBS洗了三次3分钟,然后用biotin-conjugated孵化兔抗体免疫球蛋白(1:1,000;Abcam)一夜之间在4°C。在PBS洗幻灯片后,碱性phosphatase-conjugated链霉亲和素(PBS 1:1,000;杰克逊ImmunoResearch)孵化对组织在室温下30分钟。幻灯片在PBS再次洗了三次三分钟和抗体绑定与快速检测出红底物(BioGenex) (64年)之后,与迈耶的苏木精复染色(Biogenex)。Non-RHD心脏组织作为消极的控制。染色的组织是由至少3个人和分级阅读0±1 + 2 + 3 + 4 +的范围从零个或没有染色或= /−或很弱的染色,1 +清晰可见,但光染色;2 +或温和的染色,3 +中度到重度染色,和4 +最强的染色可见读入一个奥林巴斯双光和荧光显微镜与计算机摄影操作台和相机连接到显微镜。

心脏组织从RHD检测心脏tissue-bound抗体检测使用biotin-conjugated兔子反IgG1 IgG2, IgG3, IgG4单克隆抗体(西格玛化工有限公司)在一夜之间在4°C的环境中。组织在PBS洗3次3分钟和孵化碱性phosphatase-conjugated链霉亲和素(PBS 1:1,000;杰克逊ImmunoResearch)。检测到抗体绑定使用快红底物(美国Biogenex,圣拉蒙,CA)。Non-RHD心脏组织作为消极的控制。染色细胞是由至少3个人和分级阅读0±,1 + 2 + 3 + 4 +所示图5- - - - - -7最黑暗的染色注册为4 +和最弱的为±1 +。

图1

图1所示。免疫球蛋白子类反应(μg /毫升)在ARF GlcNAc (RHD、SC、关节炎)血清相比,咽炎和健康对照组。(一)的浓度GlcNAc-specific IgG1相比,在简单的咽炎显著升高血清RHD (p= 0.001),SC (p= 0.0052)和健康控制血清(p= 0.0003),但不要风湿性关节炎(p= 0.2667)。(B)在SC GlcNAc-specific IgG2浓度显著升高血清相比,简单的咽炎(p= 0.0052)和健康的控制(p= 0.0016)血清,但不要RHD血清(p= 0.0653)。RHD血清有大量的IgG2 GlcNAc相比简单咽炎(p= 0.0431)和健康控制血清(p= 0.0155)。(C)GlcNAc-specific IgG3从简单的咽炎相比显著升高血清SC (p= 0.0115)和健康的控制(p= 0.002)血清。(D)所有团体GlcNAc-specific IgG4浓度可以忽略不计。P计算的值Mann-Whitney双尾t测试比较个体的血清心脏炎组(n= 10)SC (n= 9),关节炎(n= 3),咽炎(n= 7),和健康的控制(n = 8)(红色p价值酒吧RHD比较和蓝色p价值酒吧SC比较和黑色的p值酒吧是咽炎比较)。GlcNAc-specific IgG2显著子类应对GlcNAc RHD和SC血清咽炎和健康对照组相比,虽然GlcNAc-specific IgG1咽炎血清IgG3明显升高。NS,不重要。

图2

图2。免疫球蛋白子类反应(μg /毫升)A组链球菌M蛋白类型5 (pepM5) ARF (RHD、SC、关节炎)血清、咽炎和健康对照组。(一)在风湿性心脏炎,IgG1是占主导地位的子类应对pepM5 SC(相比p= 0.0115),风湿性关节炎(p= 0.004),简单的咽炎(p= 0.0330)和健康控制(p= 0.0002)血清。(B)在SC PepM5-specific IgG2显著升高血清相比,RHD样本(p= 0.0288)。SC和RHD血清有大量anti-pepM5 IgG2相比简单咽炎(p= 0.3148,p分别为= 0.0688)。(C)显著升高pepM5-specific IgG3发现风湿性心脏炎相比,SC (p= 0.0271),咽炎(p= 0.0023)和健康控制(p= 0.0005)血清。(D)在所有样本PepM5-specific IgG4浓度可以忽略不计。P计算的值Mann-Whitney双尾t测试比较个体的血清心脏炎组(n= 10)SC (n= 9),关节炎(n= 3),咽炎(n= 7),和健康的控制(n= 8)(红色p价值酒吧RHD比较和蓝色p价值酒吧SC比较和黑色的p值酒吧是咽炎比较)。IgG1和IgG3重大子类反应血清pepM5在RHD IgG2在SC显著。NS,不重要。

图3

图3。SC CSF (n= 3)免疫球蛋白GlcNAc PepM5气体反应的蛋白质。(一)总脑脊液免疫球蛋白GlcNAc和PepM5链球菌蛋白质。SC CSF证明显著升高GlcNAc-specific免疫球蛋白和pepM5-specific疾病控制相比,免疫球蛋白g CSF (p= 0.0177,p分别为= 0.0112)。P值被双尾韦尔奇的计算t测试比较SC和控制CSF组。(B)GlcNAc-specific IgG2主导SC CSF子类反应。SC CSF演示的浓度明显高于GlcNAc-specific IgG2 (p= 0.0021)相比,疾病控制脑脊液。SC CSF IgG2的浓度显著升高相比SC CSF IgG1(0.01)和SC CSF IgG3 (0.0002)。P值被双尾韦尔奇的计算t测试比较SC和控制CSF组。(C)SC CSF活性免疫球蛋白浓度IgG1 pepM5显示小幅升高,IgG3疾病控制脑脊液相比,但没有显著升高(p分别为= 0.1166和0.2842)。P值被双尾韦尔奇的计算t测试比较SC和控制CSF组。红点是SC疾病CSF (n= 3)疾病控制与黑点CSF (n= 3)。NS,不重要。

图4

图4。人类神经细胞IgG2的SC CSF目标。从脑脊液免疫球蛋白子类能够绑定在SK-N-SH人类神经细胞表面抗原测定快红染色与苏木精复染色紧随其后。红染色的细胞表明积极的免疫球蛋白g绑定。IgG2的SC CSF主要针对SK-N-SH细胞的细胞外表面(SC CSF - 1 = 3 +染色和SC CSF 2 = 4 +染色)相对于其他子类(蓝染色细胞,0染色)。箭头表示积极的反应。非常微弱的IgG2染色显示控制脑脊液(0.5 +染色)。相比之下,没有IgG1, IgG3或IgG4绑定到人类神经细胞疾病控制脑脊液(蓝染色细胞,0染色)。放大400×。

图5

图5。IgG2存款在活的有机体内在RHD瓣膜组织。免疫组织化学免疫球蛋白子类显示强大的人类IgG2沉积在RHD心脏组织从四个不同的患者相比其他子类所看到的快红染色的子类免疫球蛋白沉积。红染色的细胞表明积极的免疫球蛋白g绑定(见箭头)。RHD 1 IgG2染色是4 +,RHD 2 IgG2染色是4 +,RHD 3 IgG2是3 +,RHD 4 IgG2染色是4 +。微弱的染色IgG3 (RHD 3 0.5 +)和IgG4 (RHD 2 1 =, RHD 3 1 +)染色。没有可见的IgG1染色观察到任何的四个RHD样本。免疫球蛋白沉积是子类缺席控制,non-RHD心脏组织。放大400×。

图6

图6。IgG2与浸润的单核细胞RHD肉芽肿。高浓度的autoreactive IgG2被发现与单核细胞浸润在RHD心脏瓣膜组织肉芽肿(风湿病小结节)。IgG2沉积高质量上相比其他免疫球蛋白子类阀表面的肉芽肿在场(IgG1 0染色,IgG2 4 +染色,IgG3 2 +染色,IgG4 1 +染色,同形像控制0染色)。放大200×。

图7

图7。IgG2与IFN-γ和IL-17A RHD的心。(上面一行)苏木精和伊红染色(圆))四个RHD心脏组织显示浸润的单核细胞(箭头上面一行)到心脏瓣膜表面内皮(RHD 1)和心肌组织内(RHD 1 - 4)。局部病变(大箭头)中观察到心肌RHD4。Non-RHD心脏瓣膜组织(控制)缺乏单核细胞浸润,局部病变。(中间行)IFN-γRHD心脏组织的染色表明广泛IFN-γRHD1染色发现心脏组织,和RHD3组织。集中IFN-γ染色可以看到周围入侵单核细胞(RHD 1-RHD 4)。IFN-γ控制心脏组织中是没有的。放大400×。(底下一行)IL-17A染色RHD的心脏组织。四个RHD组织显示IL-17A整个心脏组织以及集中在单核细胞(箭头)(RHD 1-RHD 4),控制non-RHD心脏组织没有IL-17A礼物。放大400×。

确定CSF绑定到人类神经细胞,SK-N-SH细胞,人类神经细胞株,镀在four-chamber组织培养幻灯片1×10⁴细胞/室过夜DMEM-F12标准细胞培养条件下介质。four-chamber幻灯片用冰冷的PBS和屏蔽5% BSA在PBS孵化1:10 0稀释的CSF DMEM-F12中一夜之间在4°C。幻灯片被洗在PBS和cell-bound抗体检测使用biotin-conjugated兔子反IgG1, IgG2, IgG3, IgG4单克隆抗体(西格玛化工有限公司)为30分钟37°C其次是碱性phosphatase-conjugated strepavidin (1:1,000;杰克逊ImmunoResearch)。检测到抗体绑定使用快红底物(美国Biogenex,圣拉蒙,CA)和细胞与迈耶的苏木精复染色(Biogenex)。Non-SC CSF作为负控制疾病。染色的组织是由至少3个人和分级阅读0±,1 + 2 + 3 + 4 +所示图4最黑暗的染色注册为4 +和最弱作为相应−−或1 +和免疫化学部分中描述的方法。

间接酶联immunosorbant试验(ELISA)

胃蛋白酶链球菌M5蛋白质片段(pepM5) (65年,66年和GlcNAc-BSA抗原是如前所述67年- - - - - -69年)。净化人类IgG1 IgG2、IgG3 IgG4抗体购买从西格玛化工有限公司(圣路易斯,密苏里州,美国)。

九十六年聚乙烯,Immunolon 4微量滴定板(美国弗吉尼亚州Chantilly Dynatech实验室)被涂上一层10μg /毫升pepM5 GlcNAc-BSA或50μg /毫升的鼠标反IgG1, IgG2, IgG3, IgG4马伯的标准曲线在一夜之间在4°C。一夜之间,盘子被孵化与1:10稀释CSF在4°C, 1:1,000血清的稀释,或500 0μg /毫升浓度的人类IgG1κIgG2κ,IgG3κ,IgG4κ纯化单克隆抗体(西格玛化工有限公司)获得一个标准曲线。检测到抗体绑定使用biotin-conjugated兔子反IgG1, IgG2, IgG3, IgG4单克隆抗体(西格玛化工有限公司)其次是碱性phosphatase-conjugated strepavidin(美国杰克逊ImmunoResearch西树林,PA)。对硝基苯磷酸开发板有两个毫克/毫升104衬底(西格玛化工有限公司)100μl /在405 nm和光学密度量化一个Opsys标先生(美国弗吉尼亚州Chantilly丹尼克斯技术)。免疫球蛋白浓度子类的样本反应在子类的ELISA测定标准曲线和报告为μg /毫升BSA反应后扣除。健康控制血清和CSF non-SC疾病作为消极控制ELISA。反应性抗体的免疫球蛋白g子类GlcNAc和牛血清白蛋白(BSA)与BSA分开计算,任何反应仅减去从每个样本的整体光密度。

统计分析

免疫球蛋白子类反应GlcNAc和PepM5 ARF (RHD、SC、关节炎)血清(图1,2)相比,咽炎或健康对照组使用Mann-Whitney测试。选择Mann-Whitney测试由于小样本大小和偏态分布的响应。调整分析没有必要由于小样本大小和相对平衡各个组之间在人口统计学变量。在图3韦尔奇的t测试是用于脑脊液elisa Mann-Whitney并不足以确定p值比较小的数量正常脑脊液和SC脑脊液样本值。所有统计分析软件和使用棱镜p值< 0.05被认为是显著的。

结果

血清免疫球蛋白子类响应在急性风湿热:IgG2主导响应对碳水化合物抗原决定基组,N-acetyl-beta-D-glucosamine (GlcNAc)在RHD和SC

来确定哪些免疫球蛋白子类主导体液反应与A组链球菌ARF的碳水化合物,从RHD血清,SC, polymigrating关节炎、简单的咽炎,健康对照检查GlcNAc免疫反应性。在图1 bRHD和SC明显高于血清证明GlcNAc-specific IgG2抗体反应相比,简单的咽炎(RHD)p= 0.0431,SCp= 0.0052)和健康控制血清(RHD)p= 0.0155,SCp= 0.0016)(图1 b)。相比之下,咽炎血清证明显著升高GlcNAc-specific IgG1反应相比,健康对照组(p= 0.0003),RHD (p= 0.001)和SC (p= 0.0052)血清(图1一个)。值得注意的是,GlcNAc-reactive IgG3 (图1 c在咽炎)显著升高血清相比,健康控制血清(p= 0.0002)和SC血清(p= 0.0115)。检测到的浓度GlcNAc-specific IgG3不在RHD或polymigrating关节炎血清。感兴趣的发现是IgG1和IgG3通常由蛋白质抗原诱导,特点是能够直接增加补体的激活和调理素作用相比IgG2 (70年)。IgG4不是GlcNAc升高的血清检测。因此,IgG2似乎描述RHD和SC血清特异反应对碳水化合物抗原决定基GlcNAc ARF。

特异性免疫球蛋白子类也确定为A组链球菌M蛋白片段,pepM5,细胞外,n端一半的M5蛋白质胃蛋白酶裂解的次优的pH值(65年,66年)。免疫球蛋白子类反应pepM5蛋白质是不同于那些反对群碳水化合物抗原决定基GlcNAc (图2)。在风湿性心脏炎,pepM5蛋白反应IgG1 (图2一个)反应明显凌驾于SC (p= 0.0115),关节炎(p= 0.0330),简单的咽炎(p= 0.004),控制血清(p= 0.0002)。RHD IgG3 (图2 c()浓度也显著提高pSC = 0.0271),咽炎(p= 0.0023)和健康对照组(p= 0.0005)。相比之下,在SC, IgG2反应对pepM5 RHD相比显著升高(p= 0.0288)(图2 b)。IgG4不是任何PepM5蛋白升高的血清检测。提供的证据图1,2对链球菌抗原的反应表明,免疫球蛋白子类ARF有别于简单的咽炎并突出GlcNAc-reactive IgG2 RHD和SC的特征,这是有别于anti-GlcNAc IgG1和简单的咽炎IgG3反应。此外,免疫球蛋白反应GlcNAc有别于那些M蛋白,所示图2在心脏炎明显升高而咽炎。有趣的是,免疫球蛋白子类对M蛋白相比,SC是明确IgG2心脏炎。

从SC IgG2 CSF优先结合GlcNAc和目标人类神经细胞

评估CSF反应性链球菌抗原,免疫球蛋白特异性总GlcNAc和pepM5蛋白质被ELISA检测。总免疫球蛋白g CSF GlcNAc(含量严重超标p= 0.0177)和pepM5 (p在SC CSF(= 0.0112)被发现图3一)脑脊液样本相比其他神经系统疾病(黑点;图3)。评价免疫球蛋白子类分布的链球菌抗原浓度显示显著增加GlcNAc-specific IgG2 SC CSF与疾病控制CSF (p= 0.0021)(图3 b)。的浓度anti-GlcNAc IgG2 SC CSF也显著高于IgG1或IgG3 SC CSF的浓度。在图3 cSC CSF活性免疫球蛋白浓度,浓度升高pepM5略显IgG1和IgG3疾病控制脑脊液相比,但却没有明显升高(p分别为= 0.11和0.28)。

证明,免疫球蛋白子类潜在目标神经元,SC和疾病控制脑脊液样本孵化SK-N-SH人类神经细胞和探测与四个免疫球蛋白抗体特定子类。Autoreactive IgG2发现定性绑定到神经细胞表面更大程度上比IgG1 IgG3, IgG4 SC脑脊液样本(图4)。IgG2染色主要是缺席的疾病控制脑脊液图4控制,下半部分)。有趣的是,IgG2是占主导地位的子类绑定到神经细胞表面即使CSF ELISA结果(图4)可检测浓度IgG1 IgG3。免疫球蛋白对SK-N-SH complement-mediated细胞毒性细胞都低于10%铬释放化验(数据没有显示)。SC-derived CSF IgG2主导的数据表明,A组链球菌的抗体反应碳水化合物抗原决定基GlcNAc,和autoreactive IgG2定性约束(SC CSF - 1 = 3 +红色污点,SC CSF = 4 +)对人类神经细胞在SC CSF大大超过其他子类。

Autoreactive IgG2是主要沉积在子类RHD心脏瓣膜组织

确定子类autoreactive的特异性免疫球蛋白参与RHD,心脏组织瓣膜置换手术或尸检还进行了绑定IgG1, IgG2 IgG3, IgG4。明显IgG2 RHD的染色观察心脏瓣膜组织在所有四个RHD组织和IgG2明显过多相比其他免疫球蛋白子类(图5)。少量的IgG3明显在瓣膜组织IgG2相比,很少IgG1或IgG4染色观察。没有观察到免疫球蛋白子类沉积在心脏组织的控制。IgG2存款RHD瓣膜组织明显突出和强调anti-GlcNAc IgG2,在RHD显著升高血清,可以直接存款和贡献在RHD心脏炎。虽然有显著升高血清浓度IgG1和IgG3 pepM5 RHD血清,只有弱IgG3染色可见的心脏组织。总的来说,数据显示,autoreactive IgG2优先结合在RHD心脏瓣膜组织,可能导致细胞浸润和炎症在风湿性心脏炎瓣膜变化。前发现高反应组碳水化合物抗原与严重瓣膜疾病和贫穷的结果支持我们的研究结果(59)。

Th17 / Th1细胞渗透心脏瓣膜和配合IgG2沉积在风湿性心脏炎

以确定autoreactive IgG2沉积发生在细胞的病理学、RHD组织包含著名的肉芽肿(Ashoff结节)染色法检测免疫球蛋白子类。强大的IgG2沉积是观察到的较小数量的IgG3和IgG4肉芽肿(图6)。四个RHD IgG2沉积都有明显升高的心脏组织单核细胞浸润的苏木精和eosin-stained组织(图7上面一行),它没有在non-RHD控制心脏组织(图7上面一行)。

IFN-γ与同形像切换事件导致IgG2 B细胞分泌,并已发表在RHD心脏病变和T细胞或克隆隔绝RHD心以及从刘易斯实验性自身免疫性心瓣炎大鼠心脏组织(由)模型(29日,71年- - - - - -73年)。所有四个RHD组织被发现高浓度的IFN-γ相比控制non-RHD心脏组织(图7中间行)。Th17细胞已报告为心肌炎的病理和以前的报告表明Th17细胞的存在RHD心(64年,74年)。来确定Th17细胞出现在风湿性心脏炎瓣膜组织,IL-17A被免疫组织化学评估。IL-17A贯穿所有四个RHD心肌和瓣膜组织建议autoreactive Th17细胞入侵到阀和心肌组织(图7底下一行)。没有观察到控制IL-17A non-RHD组织(图7底下一行)。在这项研究中,我们证明autoreactive IgG2, IFN-γ,IL-17A被发现同时在RHD组织评估。总的来说,数据显示,autoreactive IgG2连同合作Th1 / Th17反应为RHD的开发和发展作出贡献。

讨论

以前,我们的研究主要集中在理解气体之间的免疫crossreactivity和分子拟态和心脏和大脑组织抗原(14,15,21)。在最近的研究中,新的证据表明沉积的IgG2 RHD心脏组织,表明抗体针对阀门相伴与渗透autoreactive Th17 Th1 / T细胞的子集。此外,在SC, GlcNAc-specific IgG2 SC-derived CSF的浓度明显高于IgG1, IgG3, IgG4, IgG2主要子类承认在人类神经细胞的细胞表面抗原。我们的证据显示IgG2抗体组碳水化合物抗原决定基GlcNAc疾病特异性抗体或生物标志物在ARF目标阀在SC RHD和人类神经细胞。高架IgG2应对GlcNAc RHD独有,SC血清相比polymigrating关节炎和简单的咽炎。在RHD,持续高水平的anti-GlcNAc针对心脏组织细胞可能导致阀门的倾向在过滤通过调理素作用后的阀门有可能上调纤维化由于IL-17A响应以及TGF-β1 RHD基因变异(49)。IgG2如此强烈沉积与其他子类瓣膜表面相比,在某些情况下,它可以观察到在某些组织免疫染色后用肉眼。在SC CSF,只有大幅IgG2子类绑定到人类神经细胞。感兴趣的是浓度显著升高GlcNAc-specific IgG1和IgG3简单咽炎血清相比,RHD和SC血清。IgG1和直接补体的激活和opsonization-phagocytosis IgG3强烈。可能的分泌IgG1 IgG3导致快速去除气体在简单的咽炎,从而减少潜在的后遗症的发展。

当我们提出机制的假说,GlcNAc-specific IgG2可以发挥主导作用在RHD阀门的T细胞亚群,IgG3不能打折,必须考虑其潜在作用在RHD IgG3强烈直接complement-mediated细胞毒性效应函数主要缺席IgG2 (75年)。以前,我们证明了内皮细胞的细胞毒性RHD-derived人类马伯与(1)强烈crossreactive GlcNAc和层粘连蛋白,以及(2)一个高度crossreactive层粘连蛋白多肽和(3)阀门表面内皮(15)。我们可以推测,早期生产的心脏IgG3会启动损坏阀门导致明显的炎症和水肿阀门的传单,反过来可能取而代之的是持续IgG2沉积和伴随细胞渗透IFN-γ和IL-17A指导描述RHD的炎症。水肿的早期损坏阀传单中演示了我们的RHD刘易斯的心瓣炎大鼠自体免疫模型(73年)。心瓣炎模型的进一步研究将有助于识别子类和T细胞亚群与心脏损伤的起始和持久性。

GlcNAc-specific IgG2显著低于咽炎RHD和SC血清相比,这一疾病的潜在生物标志物。浓度升高以及持续的IgG2从重复的链球菌感染可能开始的炎症级联阀为进一步损伤内皮表面炎症T细胞亚群Th1和Th17和潜在的增强纤维化的TGF-β1 RHD基因变异发现(49)。几年前阀表面的显示表达碳水化合物抗原表位(76年GlcNAc)相似,它是建立这层粘连蛋白糖基化的蛋白质。

的贡献autoreactive IgG2 RHD并不完全清楚。IgG2是有效指导调理素作用,可以招募巨噬细胞,DCs,和中性粒细胞通过FcγRIIa受体(CD32a),然而,这是一个可怜的激活补体级联(75年)。在这项研究中,IgG2是占主导地位的子类绑定到RHD组织。之前我们已经表明的upregulation VCAM-1心脏瓣膜组织(24)。此处所示的相同的心脏组织用于VCAM-1 IgG2的研究,因此,很明显,VCAM-1 upregulation发生与IgG2沉积与免疫细胞的渗透到阀导致纤维化和瓣膜畸形。未能遵循预防性抗生素治疗方案以防止继续重复链球菌感染疾病加强ARF允许阀门当有后续气体感染(24)。因此,IgG2特别可能导致心脏损害的每集指挥巨噬细胞,DCs,中性粒细胞在心脏组织进一步促进炎症和阀损害与抗原决定基传播建议(77年)。CD68 +巨噬细胞浸润和CD80 + DCs与tenascin-C浓度增加,细胞外基质重塑的标志和纤维化RHD心里(78年,79年)。

在IgG2 + RHD组织,细胞由干扰素+和IL-17A +细胞浸润建议Th17 / Th1潜在的发病机制,这可能涉及Th17可塑性(80年),这对Th17之间的关系提出了疑问和Th1 (81年,82年)。在自身免疫性疾病,Th1细胞可能演变成为自治和直接反应抗原肽从当地组织的演讲(83年)而在急性RHD / ARF Th1细胞必须应对链球菌和地方crossreactive抗原分子拟态和未达到自治状态,他们将响应主要是自体抗原可能在疾病。与其他自身免疫性疾病的兴衰成败,青霉素治疗预防严重疾病的进展ARF发病后的头几年,通过防止重复链球菌感染和进一步自身免疫易感主机(84年)。然而,慢性瓣膜疾病可能不如对预防性抗生素治疗(85年)和预防由于血流动力学压力归因于transvalvular压力梯度(49)已经损坏的阀门可以发布有针对性的免疫反应对胶原蛋白(48)。

Th17细胞与自身免疫密切相关(86年- - - - - -90年)。天然气已被证明引起一个健壮的Th17反应在小鼠和人类保护和上呼吸道粘膜感染,会导致自身免疫(64年,74年,90年- - - - - -103年)。在我们目前的研究中,RHD心被渗透IL-17A和IFN-γ产生单核细胞伴随IgG2沉积。在早期的研究中,从RHD二尖瓣组织il - 6的表达增加,IL-17, IL-21, IL-23,在人类自身免疫性心肌炎,Th17细胞分泌IL-17A和IFN-γIL-23 (64年,74年)。

GlcNAc特定抗体的证据显示一个潜在的作用及其与预后不良的心脏瓣膜病和结果急性RHD (59)。我们假设阀门的IgG2目标依赖于碳水化合物抗原决定基,包括链球菌GlcNAc之间的模仿和阀门表面糖蛋白的基底膜和瓣膜心内膜。层粘连蛋白包含α螺旋结构与人类RHD-derived crossreacts马伯活性与A组链球菌碳水化合物抗原决定基GlcNAc和α螺旋卷曲螺旋链球菌M蛋白(15,76年,104年- - - - - -109年)。IgG2沉积在阀门和心脏组织和高架anti-GlcNAc RHD血清中抗体结合低GlcNAc-specific咽炎IgG2反应表明疾病特异性和最终IgG2可能负责指导渗透Th1细胞Th17A子集以及潜在的细胞毒性IgG3对阀的反应。我们建议可能存在异常高浓度的GlcNAc-specific IgG2生产在RHD对气体和SC表型类似于高水平的anti-GlcNAc在Balb / c小鼠免疫反应报告与A组碳水化合物抗原。显著提高免疫反应被GlcNAc BALB / c小鼠比低反应C57BL / 6, CBA和DBA / 2小鼠(110年,111年)。

干扰素γ已知信号B细胞同形像切换事件IgG2子类(61年)。在最近的研究中,发现IFN-γ所有RHD心里测试,和以前报道在RHD的发病机制(29日,71年,112年,113年)。人类T细胞克隆也发现分泌Th1细胞因子与a组链球菌抗原刺激时的模式如M蛋白(16,25,29日,114年,115年)。此外,RHD的刘易斯鼠模型与M5重组蛋白免疫发达心肌炎及心瓣炎的特点是高水平的IL-17A分泌和IFN-γ表明这两种细胞因子在一起重要的病理RHD (116年)。

过渡的Th17传达Th1细胞(CD161 + / CCR6 +)被认为是与自主发展的响应Th1细胞状态,Th1从Th17过渡后,应对自体抗原的攻击器官导致组织损伤(83年,117年- - - - - -121年)。这可能直接反应变得更加阀特定疾病进展(48)。CD4 + T淋巴细胞在我们先前的研究,更有丰富的RHD心里和风湿病小病变瓣膜,然而CD8 +淋巴细胞也存在和已知也产生IFN-γ。CD8 + T细胞的特定角色RHD已经在心脏瓣膜病(未知24)。在最近的研究中,细胞毒性的CD8 + T细胞与慢性成人RHD瓣膜病变公认的胶原蛋白和相同的序列从collagen-like链球菌蛋白质。granzyme的CD8 + T细胞表达穿孔素和雌激素受体α和HLA我得到prothymosinα,一个新的潜在的血液和组织中描述生物标志物RHD (48)。研究强调阀主要疾病在妇女和模仿的重要性与链球菌或其他细菌胶原蛋白序列(48)。先前的研究主要限于CD4 + T细胞在RHD承认CD8 + T细胞存在但不是在相同的数字CD4 + T细胞(24)。女性性别偏见在慢性RHD进一步支持的占主导地位的识别共享抗体特异基因型在RHD发现和共享与系统性红斑狼疮(SLE)和干燥综合征(122年),主要系统性自身免疫性疾病在女性的心也受到影响。

分子拟态是重要疾病的起始与自身免疫的发生。自身免疫的发展之后,一个更慢性疾病在阀门可能会以不同的速率在不同的个体,由于存在大量的重复感染,血流动力学的压力阀,以及对疾病的易感性的基因遗传。这些可能是基因和疾病易感性因素包括水平的提高TGF-β1生产(49)、HLA (50- - - - - -55),和接触其他心脏或组织蛋白(77年)参与传播Th1细胞与组织抗原识别的抗原决定基可能在心脏主导更多的慢性疾病。如果IgG2继续遵循阀门上的沉积过程中伴随的暴露的胶原蛋白(3,46),高架TGF-β1 (49)、纤维化和瘢痕和新血管形成从损坏的阀门,在后期进一步损害的慢性疾病可能的CD8 + T细胞和胶原蛋白的识别(37)。很明显,炎症导致纤维化。

SC,大脑ARF的表现,特点是作为驱动的基底神经节脑炎抗体(40,41,123年- - - - - -130年),主要的病理发现血管周的成套的船只和沉积在基底神经节的抗体(129年,131年)。SC Th17细胞的作用以及其他A组链球菌在人类自身免疫性后遗症仍然是模糊的。然而,在气体感染的小鼠模型,Th17细胞中发现nasal-associated淋巴组织(NALT)迁移通过嗅球进入中枢神经系统后鼻内气体的挑战(99年)。虽然没有气体细胞在中枢神经系统,被发现的证据强烈建议IL-17A破坏血脑屏障(BBB)允许crossreactive抗体进入大脑。在小鼠气体引起的自身免疫性脑炎,CNS-infiltrating Th17细胞分泌IL-17A和IFN-γ所需的BBB,使交通中断的抗体和小胶质激活导致实验动物的神经病理变化(132年)。类似的机制可能会扰乱BBB SC允许通过autoreactive抗体和T细胞。

在SC和相关疾病,脑成像研究显示基底神经节的扩大表明炎症过程(37,38,124年,125年,133年,134年)。Anti-neuronal SC中发现的自身抗体和相关儿童自身免疫性神经精神障碍与链球菌感染有关目标多巴胺受体(熊猫),可能会导致这些疾病的特点和作为疾病的生物标记物(3,12,40,41,135年)。集体,SC的病理表明non-cytotoxic autoantibody-mediated基底神经节脑炎和支持的IgG2病因crossreactive抗体组碳水化合物抗原GlcNAc导致神经元的异常信号,而不是complement-mediated基底神经节细胞毒性破坏(14)。

我们研究的局限性包括少量的组织和血清样本试点研究,和我们没有执行任何研究crossreactivity除了与细菌的碳水化合物抗原。进一步说,我们的许多先前的研究ARF-derived人类马伯了crossreactivity GlcNAc和自身抗原之间包括心肌肌凝蛋白和层粘连蛋白在心脏以及lysoganglioside,微管蛋白和多巴胺受体在大脑组织或神经元(14,15,39,40,44,73年,136年)。尽管我们没有人类马伯的IgG2子类进行调查,人类ARF派生马伯,与GlcNAc反应是最有力的证据表明anti-streptococcal GlcNAc抗体(血清和脑脊液免疫球蛋白和人类mab)与crossreactivity心脏和大脑。

总之,我们的研究表明一个新的潜在生物标志物ARF, RHD, SC可以提高对ARF病理生理学的理解。GlcNAc特定IgG2被定义为主要免疫球蛋白GlcNAc具体子类RHD和SC在组织和血液,这增加了我们的A组链球菌后遗症和发病机理的基本理解。进一步GlcNAc-specific IgG2区别和分离简单咽炎的体液免疫球蛋白子类反应ARF (RHD和SC)。Th1 / Th17细胞中发现RHD和SC可能引起器官具体合作自体免疫T细胞在心脏和大脑疾病的反应和Th1 IFN-γ响应将推动开关IgG2的免疫球蛋白g子类。疾病具体IgG2免疫反应在RHD GlcNAc和SC支持我们的许多先前的研究显示心脏和大脑crossreactive免疫球蛋白自身抗体和人类从RHD马伯,SC,认识到GlcNAc A组链球菌抗原决定基的碳水化合物。这部小说发现水平的提高GlcNAc-specific IgG2定义ARF (RHD和SC)提出了我们的理解水平ARF病理生理学以及链球菌疫苗和他们的安全的管理,新颖的诊断和治疗的未来发展策略来识别风险和疾病,早期识别,管理和防止严重和ARF的慢性心脏瓣膜损伤或神经精神残疾。未来的研究需要从全世界的患者人群来,是想确定一下我们这里提出“GlcNAc-specific IgG2”假说和支持我们的证据。

数据可用性声明

原始数据支持了本文的结论将由作者提供,没有过度的预订。

道德声明

俄克拉荷马大学健康科学中心,犹他大学医学院的内部审查委员会和NIMH的内部审查委员会审查和批准所有协议人体研究分析了手稿。书面知情同意参加本研究参与者提供的法定监护人/近亲。

作者的贡献

MC和CK写手稿和实验设计,图形和图表。啊,HC、CK和KA手稿进行实验。MC、KA和CK负责设计和生产数据的手稿。HH和问病人样本ARF爆发并提供讨论和研究临床信息和HH辅助手稿。DJ提供组织样本RHD患者来自南非和辅助的手稿。SK手稿的病理学研究和协助执行。党卫军提供临床血清和脑脊液样本特征从西德汉姆舞蹈病患者和辅助的手稿。YZ提供专家统计分析和写作的手稿。所有作者的文章和批准提交的版本。

资金

这项工作是由美国国立卫生研究院(NIH)国家心脏、肺、血液研究所R37HL35280, MC的绩效奖,和R01HL56267 R01HL135165 MC。统计分析部分由国立卫生研究院,医学科学研究所授予2 u54gm104938,π,朱迪斯·詹姆斯。

确认

我们想把这个手稿Drs的记忆和工作晚。伊利亚Ayoub Maclyn马克卡迪的支持和重要贡献的理解组碳水化合物和已故的约翰·巴洛博士联系我们Jankelow博士和成为可能的可用性风湿性心脏病组织。Ayoub博士发现的相关性提高抗体结果的A组链球菌碳水化合物/风湿性心脏瓣膜病的预后。麦卡蒂博士发表的早期工作在A组碳水化合物和丽贝卡Lancefield博士的同事确认了链球菌组根据他们的碳水化合物抗原。巴洛博士是一个巨大的心脏病和心脏瓣膜的专家。我们发现是建立在那些之前我们的肩膀上的时候,风湿热猖獗在儿科病房到处都在美国。基因Stollerman博士路易斯Wannamaker博士和许多其他人的那个时代留下的遗产转化影响我们今天的科学和医学。我们还要感谢Drs。埃德温Beachey和基因Stollerman,坎宁安博士的博士导师,以及体能训练时文斯博士Fischetti这样提供指导和链球菌疫苗和理解作出了重要贡献A组链球菌M蛋白的结构;和约瑟夫博士Ferretti使坎宁安博士开始她的职业生涯在俄克拉荷马大学健康科学中心。 We express our deepest appreciation to Janet Heuser and Adita Mascaro-Blanco for their years of expert technical assistance, to Dr. Chandra Menendez for review of the manuscript, and to Dr. Paul Grant and Margaret Pekar who tirelessly worked to provide clinical samples to our laboratory from the National Institute of Mental Health (NIMH).

的利益冲突

MC,揭露她的归属作为首席科学官/顾问兼联合创始人Moleculera实验室在俄克拉荷马城,好公司提供的诊断测试anti-neuronal自身抗体在自身免疫性神经和精神疾病。党卫军,没有利益上的冲突。虽然她是一个合作发明者anti-neuronal自身抗体/ CaMKII面板中,无论是她还是NIMH收到任何专利使用费。CK,披露持有部分的专利发展anti-neuronal自身抗体检测,从Moleculera实验室收到版税。

其余作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

出版商的注意

本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。

缩写

气体,A群链球菌;ARF、急性风湿热;RHD,风湿性心脏病;SC,西德汉姆舞蹈病;干扰素γIFN-γ;TNFα,肿瘤坏死因子α;马伯,单克隆抗体;CSF,脑脊液。

引用

1。Gewitz M,巴尔的摩R, " L,紫貂C,舒尔曼年代,Carapetis J, et al。琼斯的修订标准的诊断急性风湿热的耳朵多普勒超声心动图:美国心脏协会科学声明。循环。(2015)131:1806-18。doi: 10.1161 / CIR.0000000000000205