原始研究的文章

前面。Cardiovasc。地中海,2023年3月02
秒。心脏衰竭和移植
卷9 - 2022 | https://doi.org/10.3389/fcvm.2022.951704

抑制SMOC2减轻心肌纤维化通过亲属/ p38通路

黄锐 ^1、2、3

方赵^1、2、3

Lei昙花^{4 __}

江在香港^{1、2、3 *}

¹武汉大学人民医院心内科,武汉,中国
²心血管研究所,武汉大学,武汉,中国
³湖北省重点实验室心脏病,武汉,中国
⁴中心医院的心内科恩施土家族苗族自治州,恩施城市,中国

背景:心肌纤维化是一种不良的主要病变心脏重构,这是与心脏病患者不满意的结果。进一步调查心脏纤维化的确切分子机制急需寻求替代治疗策略为个人患有心脏衰竭。SMOC2已被证明是必要的在各种生理过程发挥重要的病理生理作用在活的有机体内,可能导致纤维化的发病机制。一项研究调查SMOC2和心肌纤维化之间的关系尚未进行。

方法:老鼠收到连续ISO注入皮下注射诱导心肌纤维化和下调SMOC2是通过腺相关virus-9 (AAV9)介导的shRNA击倒。新生儿成纤维细胞分离和培养在体外TGFβ触发纤维化和感染sh-SMOC2或sh-RNA作为控制。SMOC2在心肌纤维化的作用和机制进行了进一步检查和分析。

结果:SMOC2击倒部分逆转心脏功能损伤和心脏纤维化在活的有机体内经过连续21天的ISO注入。我们进一步证明针对SMOC2表达有效地慢了下来反式心脏成纤维细胞的分化和胶原蛋白沉积TGFβ刺激。从力学上看,目标SMOC2表达抑制的同类和p38的感应在活的有机体内和在体外,同类超表达p38磷酸化活动增加和妥协sh-SMOC2-mediated心脏纤维化的保护作用。

结论:通过抑制治疗SMOC2压制缓解心脏纤维化亲属/ p38信号,为心脏重构提供预防和控制战略管理在临床实践中。

介绍

不良心脏重构,定义为左心室(LV)解剖结构的变化和功能,是一种常见的并发症在患病的心脏由于数组内部的和额外的心脏病理生理条件和与一个贫穷的结果和缩短生存与心脏病住院个人介绍(1- - - - - -3)。影响从大量证据表明,现有异常肥大心肌细胞和永久激活心脏成纤维细胞基本pathomechanisms心力衰竭(4)。先前的研究已经证明了一种蛋白激酶和MAPK通路参与心肌重塑和心肌纤维化,已被广泛公认的(5,6)。然而,心肌的纤维化是一个复杂的病理过程与多因子的病因,并进一步深入调查的具体分子机制仍急需改善预测(4,7)。

SMOC2 SPARC-related模块化的钙结合蛋白2合成一个模块化的分泌蛋白质包含一对FS域和一个电子商务领域和主要存在于肾脏、肺、心肌、骨骼肌和卵巢,形式的一部分BM-40 / SPARC /骨粘连蛋白蛋白质家族SMOC1 (8,9)。由于绑定到细胞表面受体,细胞因子、蛋白酶,SMOC2调节cell-matrix互动,促进缺血心肌微血管再生和肿瘤细胞生长(8,10- - - - - -12)。SMOC2是涉及一些临床前研究导致纤维化疾病的规定(13- - - - - -16)。先前研究结果表明SMOC2可以刺激肾fibroblast-to-myofibroblast转换或转型,促进细胞外基质的合成,并最终导致肾脏纤维化(13)。作为这一发现证据,鑫et al。(14)透露,沉默SMOC2可能影响肾脏炎症、纤维化和功能在慢性肾脏疾病(CKD)老鼠。随后的一项研究发现,SMOC2淘汰赛是可以减轻bleomycin-induced肺纤维化(15)。此外,网络表达谱数据的分析确定了SMOC2可能与心力衰竭的发病机制(17),这可能暗示可能SMOC2和心脏纤维化之间的联系,尽管缺乏研究证明这种联系。

研究表明,SMOC2发挥其生理效应在活的有机体内通过转导integrin-linked激酶(同类)介导的细胞内的信号级联(18,19)。SMOC2也直接参与激活的同类,使它向前推动细胞周期(20.)。过度的同类增加心脏成纤维细胞的胶原蛋白I型表达式通过激活核factor-κB (NF-κB),而沉默的同类导致相反的效果(21)。此外,p38-MAPK,普遍接受的途径包括纤维化,由亲属也可以被激活(22- - - - - -24)。研究人员发现,家族直接激活P38 MAPK影响osteoblading效果,可以逆转如果同类目标是沉默(24)。

到目前为止,还不清楚如果通过刺激p38的同类有助于心脏纤维化。因此,我们设计和构思本研究调查的影响SMOC2心脏纤维化和了解详细的机制。

材料和方法

试剂

转变增长factor-β(TGF-β,763104)从Biolegend购买(美国圣地亚哥,CA)。异丙肾上腺素(ISO, I5627)获得Sigma-Aldrich和DD准备水。SMOC2 (sc - 376104, 1:50 0免疫印迹和缎1:10 0)和同类(sc - 20019, 1:50 0)抗体来自圣克鲁斯生物技术有限公司(圣克鲁斯、钙、美国)。I型胶原抗体,1:1000),胶原蛋白类型III (Col三世,1:1000)phospho-JNK (Tyr185 1:1000)、物(1:20 00),phospho-p38 MAPK (Thr180 / Tyr182 1:1000) t-p38 (1:1000) phospho-AKT (1:5000) t-AKT(1:5000)和3 -磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH 1:4000)获得Proteintech(武汉,中国)。Anti-α平滑肌肌动蛋白(染色a-SMA, 1:10 0)抗体购自Abcam(英国剑桥)。

动物和治疗

所有动物实验过程进行了动物保健和使用委员会的监督下的武汉大学人民医院和建立符合指南发布的美国国立卫生研究院的。八周大的雄性C57BL / 6小鼠体重(23.5±2 g)提供的是三峡大学实验动物中心(湖北、中国)在这项研究中,并适应实验场景他们使用前5 - 7天。在标准环境条件下,所有的动物喂养小球的饮食和水没有限制。小鼠皮下注射ISO(10毫克/公斤3天,5毫克/公斤11天)诱导心脏纤维化(25- - - - - -27)。正常对照组,同等体积的生理盐水是管理。四个星期前注射ISO,老鼠收到一个静脉注射腺相关病毒9 (AAV9)携带小发夹RNA对SMOC2 (sh-SMOC2)及其相应的负控制(成分)由Obio技术(中国上海)来验证其作用在活的有机体内。动物被随机分配到四组:控制+ sh-RNA控制+ sh-SMOC2, ISO + sh-RNA, ISO + sh-SMOC2。动物被过度吸入后牺牲有限公司₂,他们的心和胫骨收获和测量计算心脏重量(HW) /体重(BW)和HW /胫骨长度(TL)。

超声心动图

建模后,超声心动图评估下进行光麻醉Vinno 6日超声设备和多普勒成像(VINNO6 Vinno公司、中国)。水平的左心室乳头肌,极震区M-mode跟踪是用来测量以下参数:左心室收缩末期直径(LVEDs)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室后壁厚度(LVPW)、心室间隔厚度(IST)、射血分数(EF)、左部分心室缩短(FS)。

细胞培养和治疗

胰蛋白酶、胶原酶II的混合物被用来提取CFs的心1 - 3天的老鼠。CFs培养介质中10%的边后卫(胎牛血清)37°C和5%二氧化碳去除non-adherent细胞后1 h。non-adherent细胞1 h,后被移除和附着CFs DMEM / F12培养基培养含有10%的边后卫(胎牛血清)37°C和5%的二氧化碳。下面的实验与2 - 3通道的慢性疲劳综合症。8 h后血清DMEM / F12文化,与TGFβ细胞被刺激。为了SMOC2击倒,CFs与短发卡RNA (sh)腺病毒转染SMOC2由上海Jikai基因化学科技有限公司有限公司作为一个消极的控制,腺病毒表达短发夹(sh)使用了GFP。确认同类的角色,CFs与腺病毒携带的同类(Ad-ILK)或转染绿色荧光蛋白(Ad-GFP)。

胶原蛋白含量测定

商业ELISA试剂盒(胶原蛋白我从Uscnlife第三和胶原蛋白ELISA试剂盒,武汉,中国)是用来衡量胶原蛋白我和III内容心脏成纤维细胞后的细胞培养上清液与或没有TGFβ孵化。

组织学分析和免疫荧光

心脏组织样本固定在4%多聚甲醛和嵌入在石蜡切成5微米部分。心脏组织形态学和心脏纤维化评估与苏木精和伊红(他)和马森染色,分别。使用图像J软件进行定量分析。

CFs与免疫荧光染色病情很讲究。简单,细胞透化作用增强和4%多聚甲醛固定后20分钟,其次是孵化的50 - 100μl中断缓冲在室温下10分钟。电池盖玻片是孵化anti-α-SMA和anti-SMOC2一夜之间在4°C。第二天,细胞被孵化与山羊anti-mouse (SMOC2) pre-adsorbed或山羊anti-rabbit(α-SMA) pre-adsorbed二级抗体1 h。核随后被沾4′,6-diamino-2-phenylindole (DAPI)与荧光显微镜和图像拍摄。

免疫印迹和rt - pcr

心脏组织或细胞准备提取总蛋白与里帕裂解缓冲(Servicebio,武汉,中国)。提取的解决通过8和12%钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)和转移到PVDF膜(美国密理博公司贝德福德,MA)使用标准的协议。然后,细胞膜和脱脂牛奶在室温下孵化1 h。膜主要孵化与特定的抗体在4°C一夜之间,其次是bio-tinylated二级抗体(山羊anti-mouse合和山羊anti-rabbit合在室温下2小时。膜的清洗与TBST上面提到的每一步之间的三倍。最后,墨迹都检测到一种高度敏感ECL试剂(Biosharp,北京)。

总RNA提取使用试剂盒试剂(Servicebio,武汉,中国),和一个互补脱氧核糖核酸合成装备进行了合成cDNA遵循制造商的协议。实时PCR进行了使用EnTurboTM SYBR绿色PCR SuperMix工具包(麋鹿生物技术)。GAPDH mRNA水平正常化。分子生物学测试是由那些还不知道的动物和细胞治疗的条件。

统计分析

使用SPSS 26.0软件进行分析。所有结果给出的平均值±标准错误的意思是,和t以及用于比较两组,和单向方差分析被用于三个或更多组,其次是post L-S-D测试。被认为具有统计显著性差异p< 0.05。

结果

SMOC2 ISO-induced小鼠模型中高度表达

我们首先研究SMOC2表达式是否改变ISO-induced小鼠模型。老鼠每天与ISO或同等体积的生理盐水作为21天所描述的控制。发现SMOC2 ISO组蛋白质含量明显增加,是胶原蛋白的积累类型我和III (图1模拟)。值得注意的是,rt - pcr进一步透露的表达水平增加SMOC2 ISO集团(图1 e)。上述观察强烈暗示SMOC2可能发挥重要作用在调节ISO-induced心肌重构。

图1

图1所示。在ISO-induced老鼠心中SMOC2表达增加。(模拟)免疫印迹图像和定量的结果SMOC2,胶原蛋白I,胶原蛋白三世在对照组和ISO集团(n= 6)。(E)rt - pcr分析SMOC2 mRNA水平在两组(n= 6)。*p< 0.05。

SMOC2击倒部分逆转心肌功能丧失和心肌纤维化ISO刺激的反应在活的有机体内

我们下一个试图探索具体SMOC2 ISO-induced心肌纤维化的影响。考虑上调ISO-induced SMOC2表达的小鼠模型,我们构造一个SMOC2-knockdown AAV9系统感染小鼠如前所述。

所示图2 a - c,心动物管理sh-SMOC2明显下降SMOC2 mRNA和蛋白表达后4周相比,老鼠sh-RNA对待的心。小鼠感染sh-RNA接受ISO注射3周发达心脏机能减退,表现为降低EF、FS、LVEDd高程,LVEDs, HW / TL和HW / BW (图2曹磊)。值得注意的是,心脏功能部分逆转小鼠注射sh-SMOC2 (图2曹磊)。ISO管理和感染sh-SMOC2心室壁厚的影响,然而(图2 k, L)。

图2

图2。SMOC2击倒部分逆转心肌功能损失。(A, B)SMOC2表达式sh-RNA或sh-SMOC2注入小鼠心脏后(n= 6)。(C)信使rna水平SMOC2 sh-RNA或sh-SMOC2注入小鼠心脏后(n= 6)。(D)代表图像的超声心动图测量心脏功能的老鼠。(E-L)超声心动图测量的射血分数(EF)、部分缩短(FS),左心室内部直径end-systole (LVIDs),左心室内部直径end-diastole (LVIDd)、HW / TL, HW / BW,在心脏舒张期心室间隔厚度(IVS),在舒张和左心室后壁厚度(n= 8)。*p< 0.05和控制+ sh-RNA组。^#p< 0.05 vs . ISO + sh-RNA组。n。,non-significant.

此外,形态学检查发现,老鼠经历更严重的肌纤维混乱和纤维化3周后注射ISO (图3 a, B)。此外,这些组织学的变化削弱了SMOC2缺陷后(图3 a, B)。为了证实这一点,我们发现生物标记心肌纤维化。正如所料,第三我胶原蛋白和胶原蛋白蛋白质和mRNA水平下调post-sh-SMOC2注入(图3 c g)。这些发现暗示一种潜在physiopathological SMOC2在调节心脏纤维化的影响,和SMOC2击倒减少小鼠可以部分逆转心肌功能和心肌纤维化ISO刺激的反应在活的有机体内。

图3

图3。SMOC2击倒部分逆转心肌纤维化ISO刺激的反应在活的有机体内。(A, B)代表他和马森染色和量化的图像分析(n= 6)。(一部)代表西方印迹和量化的图像数据(n= 6)。(F, G)相对mRNA水平的胶原蛋白,胶原蛋白3 (n= 3)。*p< 0.05和控制+ sh-RNA组。^#p< 0.05 vs . ISO + sh-RNA组。n。,non-significant.

针对SMOC2表达减弱心肌纤维化通过亲属和p38通路

接下来,我们继续实现进一步洞察占我们之前发现的潜在机制。已有的研究发现,SMOC2可以激活下游的同类(20.,28),它被报道参与纤维化的病理过程(21)。因此,我们关注的表达的同类。显示,与对照组相比,ISO + shRNA注射组明显高于同类水平的影响,重要的是,可以放心的同类生产SMOC2击倒(图4 a, B)。鉴于AKT, AMPK途径与纤维化的病理生理学,我们检查了这些通路是否参与SMOC2-medicated心肌纤维化的过程。发现p-AKT、p-p38-MAPK p-JNK-MAPK ISO + sh-RNA组明显升高,而p-p38减少在ISO + sh-SMOC2集团(图4 a, D)。引人注目的是,推倒SMOC2并不影响p-JNK和p-AKT(的表达图4 c, E和补充图1 f)。总的来说,这些发现表明,同类和p38途径可能参与ISO-induced心脏纤维化的过程在活的有机体内。

图4

图4。针对SMOC2表达减弱心肌纤维化通过亲属/ p38通路。(安妮)代表西方墨迹图和定量结果的同类,t-AKT, p-AKT, t-JNK, p-JNK t-p38, p-p38 (n= 6)。*p< 0.05。n。,non-significant.

SMOC2上调TGFβ-induced心脏成纤维细胞

获得进一步洞察SMOC2在心脏纤维化的规定,我们进行的在体外随后的实验。新生儿心肌成纤维细胞分离的微分附着探索SMOC2在所述TGFβ-induced纤维母细胞激活。结果显示TGFβ诱导成纤维细胞活化存在剂量依赖的相关性和时间的方式。在对待TGFβ(10 ng / ml) 24 h, SMOC2达到最高的蛋白质浓度(图5 f)。因此,细胞治疗TGFβ10 ng / ml的24小时之前收获在后续分析。

图5

图5。SMOC2上调TGFβ-induced心脏成纤维细胞。(A, B)代表西方印迹和定量结果SMOC2 TGFβ在不同浓度引起的心脏成纤维细胞(n= 6)。(C)信使rna水平SMOC2 TGFβ在不同浓度引起的心脏成纤维细胞(n= 3)。(D, E)代表西方印迹和定量结果SMOC2 TGFβ感应后在不同的时间(n= 6)。(F)mRNA水平SMOC2心脏成纤维细胞在诱导TGFβ在不同的时间(n= 3)。*p< 0.05。n。,non-significant.

敲门SMOC2提高增殖、迁移、分化和加剧了成纤维细胞的纤维化在体外

为了讨论背后的潜在影响和机制pro-fibrotic SMOC2的影响,我们用sh-SMOC2或sh-RNA控制感染的慢性疲劳综合症。所示图6 a - c,与TGFβ接受治疗后24 h, SMOC2蛋白质和mRNA水平增加。然而,这些变化可以松了一口气后sh-SMOC2感染。此外,这些发现证实了免疫荧光染色SMOC2 (图6 d, F)。

图6

图6。针对SMOC2表达提高了增殖、迁移和分化,加剧了成纤维细胞的纤维化在体外。(A, B)SMOC2表达式sh-RNA或sh-SMOC2感染后(n= 6)。(C)信使rna水平SMOC2 sh-RNA或sh-SMOC2注入(后n= 6)。(d)免疫荧光染色的SMOC2和α-SMA表示组(n= 6)。(H I)代表图像的伤口划痕试验在0和24小时(n= 5)。(J-N)第三我胶原蛋白和胶原蛋白表达sh-RNA或sh-SMOC2感染后心脏成纤维细胞(n= 6)。*p< 0.05和控制+ sh-RNA组。^#p< 0.05 vs TGFβ+ sh-RNA组。n。,non-significant.

α-SMA表达的上调,作为差异化myofibroblasts标记一个标志,是利用免疫荧光染色检查。正如预期的那样,α-SMA水平升高在TGFβ+ shRNA集团虽然SMOC2下调降低α-SMA水平(图6 e, G)。进一步分析显示,敲门SMOC2可以减少TGFβ-induced CFs的扩散,自愈的划痕实验(图6 h,我)。进一步分析涉及蛋白质和mRNA水平的胶原蛋白和胶原蛋白三世TGFβ+ shRNA组增加,而击倒SMOC2表达显著抑制I型和III型胶原蛋白生产(图6 j-n)。

再往下,我们在媒体上测量了成纤维细胞的胶原蛋白的生产。与上面的结果一致,蛋白质含量等纤维生物标志物的I型和III型胶原在中TGFβ组升高,而SMOC2击倒可以缓解这些变化(补充图2 a, B)。

针对改善纤维化SMOC2表达式通过亲属/ p38通路在体外

为了探索sh-SMOC2 anti-fibrotic机制的影响,我们也发现的同类,AKT, MAPK通路。与结果一致在活的有机体内,同类水平升高与TGFβ接受治疗后,可抑制由sh-SMOC2管理局(图7 a, B)。深入研究还发现p-AKT、P-JNK p-P38显著上调,而sh-SMOC2感染显著降低p-P38而不影响的磷酸化水平p-AKT和P-JNK (图7 a,汉英和补充图3 f)。

图7

图7。针对改善纤维化SMOC2表达式通过亲属/ p38通路在体外。(安妮)代表西方墨迹图和定量结果的同类,t-AKT, p-AKT, t-JNK, p-JNK t-p38, p-p38 (n= 6)。*p< 0.05和控制+ sh-RNA组。^#p< 0.05 vs . ISO + sh-RNA组。n。,non-significant.(F)代表图像的伤口划痕试验后Ad-ILK感染。(G)α-SMA代表图像的免疫组织化学染色(n= 4)。(氯)代表西方印迹和定量结果帖子Ad-ILK感染(n= 3)。*p< 0.05。n。,non-significant.^#p< 0.05 vs sh-RNA + Ad-GFP组。^{# #}p< 0.05 vs sh-SMOC2 + Ad-GFP组。

接下来,我们也验证是否亲属参与p-p38在CFs的激活在体外,我们被感染的慢性疲劳综合症Ad-ILK过度表现的同类。符合上述发现,anti-fibrotic sh-SMOC2被打翻了的同类超表达的影响,和划痕实验还暗示的同类进一步促进了CFS的迁移和激活p-p38 (图7 f)。进一步确认这个概念,α-SMA的表达式包含IHC染色检查。结果还发现,Ad-ILK恶化CFs的变换(图7 g)。的结果在体外研究匹配的在活的有机体内研究。SMOC2水平并没有改变由于过度的同类(图7 h,我),但同类,第三p-p38,胶原蛋白和胶原蛋白表达明显上调(图7 h, J, km和补充图4模拟)。

讨论

我们所知,这是第一个报告SMOC2与心肌纤维化的关系。我们的研究暗示的治疗沉默SMOC2可以改善ISO-induced心肌纤维化和心脏功能降低在活的有机体内,改善增殖和胶原沉积TGFβ引起的慢性疲劳综合症在体外和同类的下调/ p38可能底层机制。

除了带来不利的结果,进步的心脏纤维化是心力衰竭的关键特征之一(3,29日)。几种etiopathogenic机制导致心肌纤维化,一个复杂和多因子的条件(5,6)。目前,心肌纤维化的治疗仍然是一个棘手的临床需要进一步解决的问题(30.,31日)。目前,只有少数药物治疗选项,比如治疗目标活动的增加肾素-血管紧张素-醛固酮系统(老城)和交感神经系统(SNS),可用来管理心脏重构和纤维化(31日,32)。尽管具有出色的功效,在某些情况下,这些药物的临床应用受到了限制由于副作用或不耐受患者(31日)。更好地了解心脏纤维化的分子机制是必不可少的发展新的治疗方法。

SMOC2模块化编码是一种分泌蛋白,影响细胞因子的活性,破坏细胞基质的依恋,和调节细胞分化和细胞周期(8,13,16,33,34)。最近发表的一项研究表明SMOC2结肠直肠癌患者的独立预后标记(35)。SMOC2被证实是一个有前途的生物标志物的CKD患者肾脏纤维化和能够使用的人员作为一个预后指标(36)。以前的研究也表明,SMOC2高度表达在肾损伤或慢性肾病模型和刺激细胞外基质的分泌,可以改善通过感染sh-RNA针对SMOC2 (14,16,36)。此外,SMOC2还参与肺纤维化,肝脂肪变性引起的高脂肪饮食以TGFβ1通路(13,15)。然而,没有一项研究调查了潜在SMOC2和心脏纤维化之间的关系,也没有深入探讨相关机制。本研究首次证实,SMOC2可能导致心脏纤维化的致病过程,这可能是拯救至少部分的删除SMOC2表达式在活的有机体内和体外。

serine-threonine-protein激酶家族,施加重要影响细胞转导和分子脚手架,被称为一个在活的有机体内SMOC2目标(18,19,37)。以前积累的证据确认,亲属与一些心肌病表型,以及参与心脏重构(37)。据透露,家族自适应增加的压力超载心脏肥大模型和可能进一步参与CFs的激活(21,37- - - - - -39)。老年病中同类促进心脏纤维化过程的核factor-κB (NF-κB)心脏成纤维细胞,激活fibrotic-related基因如CTGF和胶原蛋白。另一方面,相同的可拆卸的小干扰rna可能导致的衰减的纤维化的操作(21)。因此,据估计,家族可能有助于病理心脏重塑。符合之前的研究,我们发现的同类在持续应对自适应地profibrogenic factors-induced纤维化小鼠模型响应SMOC2的老年病。

然而,其他研究结果提供有差异的观察。亲属可能的一个关键决定因素导致心肌的保护作用re-modeling期间心肌梗死后心脏冲击波疗法(40)。更重要的是,同类超表达也最小化在缺血后再灌注心脏重构和改善41)。这些与相应的另一项研究发现在协议(42)。研究人员最近发表的一项研究显示,针对监管家族相关的途径,改善心脏功能在扩张型心肌阿霉素引起的动物,强烈暗示表达同类的增加可能改善心力衰竭患者的预后(43)。相同的基因敲除的小鼠模型也显示改变心肌电特性,可能导致致命的心律失常(37)。综上所述,这些研究表明,一个错综复杂的亲属关系和心脏纤维化和重构,和未来的研究仍然是迫切需要阐明这个问题。

越来越多的证据表明MAPK通路,比如p38和JNK1/2功能在调节心肌细胞凋亡、肥大和纤维化(44- - - - - -47)。和p38被认为是主导监管机构在心肌纤维化(48)。此外,有趣的是,一些研究已经发现了一种蛋白激酶途径是与心脏纤维化和胶原蛋白合成(5)。我们目前研究的结果符合前面的观察,表明一种蛋白激酶,p38和JNK1/2 MAPKs略pro-fibrotic刺激后激活在活的有机体内和体外。然而,意外,SMOC2击倒受损p38的表达而不影响AKT或JNK1/2途径,揭示人们作为一个贡献者SMOC2-mediated心脏纤维化的发展。CFs是完善p38磷酸化可能会促进myofibroblasts甲酸合成和胶原蛋白,可以逆转p38抑制时(6,45)。P38一直在内的各种致病的过程:如炎症(49),成骨分化(50),细胞凋亡(51),肿瘤分化(52)。具体地说,人们可能会激活几个监管机构从而发挥其生理效应。Zhang et al。(6)发现人们是由核糖体蛋白S5 (RPS5)新闻overload-induced心脏纤维化小鼠,而苦参碱政府缓解这一过程。此外,Meijles et al。(53)透露,人们是由细胞凋亡信号调节激酶1 (AKS1)过程中纤维化和随后的高血压心脏病的恶化。

有趣的是,在一项研究中,学者们发现,同类/ p38 MAPK途径可以调节成骨的影响两者的表面涂层钛(24)。他们发现的同类表面的表达明显上调C-Ti,和核目标的同类减少p38磷酸化和C-Ti表面成骨分化,揭示了家族和人们之间的关系的研究目前的研究。预期,过度的同类在活的有机体内或体外将导致增加的磷酸化p38 MAPK伴随着心脏纤维化标志物升高。

结论和局限性

我们的研究发现,SMOC2参与胶原蛋白沉积,心脏成纤维细胞激活,,最终,心脏纤维化首次回应pro-fibrotic刺激如ISO和TGFβ和亲属/ p38信号通路可能是负责这个重要的过程(图8)。此外,治疗SMOC2沉默对心脏纤维化有保护效应通过抑制亲属/ p38信号,验证SMOC2在调节心脏纤维化的关键作用,并提供承诺心脏重塑的预防和控制策略管理在临床实践中。

图8

图8。拟议的工作模型,针对SMOC2表情病理性心脏纤维化。

这项研究有一些局限性,尽管它有前途的结果。首先,我们只应用ISO诱导的心肌纤维化模型,和其他没有评估心脏纤维化模型。其次,一个人的验证结果没有执行。此外,本研究的一个重要限制是使用新生儿心脏成纤维细胞。最后,本研究未涉及SMOC2在心肌细胞的作用及其在心脏肥大作用还有待定义。因此,这项研究的结果进行解释时应特别谨慎。

数据可用性声明

最初的贡献在这项研究中都包含在本文展示/补充材料,进一步的调查可以针对相应的作者。

道德声明

动物研究是审查和批准的动物保健和使用委员会武汉大学人民医院。

作者的贡献

人力资源和FZ进行实验和分析数据。人力资源、供应和JH实验设计,监督和概念研究,撰写并编辑了手稿。人力资源和FZ写和编辑了手稿。所有作者的文章和批准提交的版本。

资金

这项工作是由中国国家自然科学基金(82160072)和科学和技术支持项目恩施县科技局(没有。D20210024)。

的利益冲突

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

出版商的注意

本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。

补充材料

本文的补充材料在网上可以找到:https://www.雷竞技rebatfrontiersin.org/articles/10.3389/fcvm.2022.951704/full补充材料

补充图1 |道达尔和磷酸化蛋白质的水平在活的有机体内。(f)量化结果t-AKT p-AKT t-JNK, p-JNK t-p38, p-p38 (n= 6)。*p< 0.05。n。,non-significant.

补充图2 |胶原蛋白我(一)和第三(B)细胞培养上清液中内容。*p< 0.05。n。,non-significant.

补充图3 |道达尔和磷酸化蛋白质的水平在体外。(f)量化结果t-AKT p-AKT t-JNK, p-JNK t-p38, p-p38 (n= 6)。*p< 0.05。n。,non-significant.

补充图4 |胶原蛋白我(C)和第三(D)细胞培养上清液和总含量(一)和磷酸化(B)蛋白质水平的p - 38。n。,non-significant.^#p< 0.05 vs sh-RNA + Ad-GFP组。^{# #}p< 0.05 vs sh-SMOC2 + Ad-GFP组。

补充图5 |原始的免疫印迹图1一个。

补充图6 |原始的免疫印迹图2一个。

补充图7 |原始的免疫印迹图3 c。

补充图8 |原始的免疫印迹图4一。

补充图9 |原始的免疫印迹图5 a, B。

补充图10 |原始的免疫印迹图6。

补充图11 |原始的免疫印迹图6 j。

补充图12 |原始的免疫印迹图7。

补充图13 |原始的免疫印迹图1 h。

引用

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谷歌学术搜索

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