@ARTICLE{10.3389/finsc.2022.959077, AUTHOR={Kolliopoulou, Anna and Kontogiannatos, Dimitrios and Mazurek, Aleksander Józef and Prifti, Izabela and Christopoulou, Vasiliki-Maria and Labropoulou, Vassiliki and Swevers, Luc}， TITLE={杆状病毒感染Hi5细胞期间荧光素酶dsRNA产生的分析:很晚启动子表达的RNA发夹不触发基因沉默}，JOURNAL={昆虫科学前沿}，VOLUME={2}， YEAR={2022}， URL={https://www.fronti雷竞技rebatersin.org/articles/10.3389/finsc.2022.959077}， DOI={10.3389/finsc.2022.959077}， ISSN={2673-8600}，摘要={杆状病毒表达载体系统(BEVS)已成为重组蛋白表达的重要平台，尤其适用于病毒样颗粒(VLPs)等大型蛋白复合物的生产。VLPs的一个重要应用是将其用作药物或毒素定向输送的载体，这需要开发有效装载预期货物的方法。我们的研究打算使用BEVS生产用于将杀虫dsRNA分子输送到目标害虫的VLPs(称为“dsRNA-VLPs”)。一种方便的策略是将长dsRNA与病毒衣壳蛋白共表达，并在VLP组装过程中同时封装它们，但迄今为止尚未评估BEVS生产长dsRNA的能力。本研究评估了杆状病毒感染过程中多面体启动子生产靶向荧光素酶基因(“dsLuc”)的长RNA发夹的效率。然而，在重组杆状病毒感染的Hi5细胞中，即使存在共表达的dsrna结合蛋白B2-GFP或使用MS2-MCP系统，RNAi报告分析也不能检测到大量的dsLuc。然而，使用抗dsRNA抗体的点杂交分析显示，杆状病毒介导的B2-GFP表达导致感染细胞中dsRNA水平显著升高，这可能对应于杂交互补病毒转录本。使用B2-GFP作为基因编码传感器，在与DAPI染色部分共定位的细胞核中检测到dsRNA病灶，与它们在病毒源间质中的定位一致。 Co-localization experiments with the baculovirus proteins vp39, Ac93, ODV-E25 and gp64 indicated limited overlap between B2-GFP and the ring zone compartment where assembly of nucleocapsids and virions occurs. Stability experiments showed that exogenous dsRNA is resistant to degradation in extracts of non-infected and infected Hi5 cells and it is proposed that strong unwinding activity at the virogenic stroma in the infected nuclei may neutralize the annealing of complementary RNA strands and block the production of long dsRNAs. Because the strong stability of exogenous dsRNA, transfection can be explored as an alternative method for delivery of cargo for dsRNA-VLPs during their assembly in baculovirus-infected Hi5 cells.} }