原创研究文章

前面。Behav。>。，22December 2022
动机和奖励
https://doi.org/10.3389/fnbeh.2022.1085882

suvorexant的替代使用(Belsomra^®)，以预防有酒精依赖史的大鼠饮酒及寻找酒精

弗朗西斯科·j·弗洛雷斯-拉米雷斯 ^＊，

杰西卡·m·伊伦伯格，

格伦·e·帕卡西奥，

亚历山德拉Matzeu，

芭芭拉·j·梅森而且

雷米Martin-Fardon

美国加州拉霍亚斯克里普斯研究所分子医学系

酒精使用障碍(AUD)是全球最难治疗的疾病之一。orexin (Orx)系统调节包括应激在内的多种生理过程，是治疗药物使用障碍，特别是AUD的药物开发的一个有趣的系统。目前的研究测试了双重食欲素受体拮抗剂suvorexant (SUV)的能力，该药物由默克公司销售，名为Belsomra^®在有酒精依赖史的雄性Wistar大鼠中，减少酒精自我管理和压力诱导的酒精寻求行为恢复。训练大鼠口服10%酒精(30分钟/天，持续3周)，并通过慢性间歇性酒精蒸汽暴露(14小时开，10小时关)使其依赖6周或暴露于空气(非依赖)。从第7周开始，每周两次测试SUV (0-20 mg/kg, p.o.)对急性戒断(关闭蒸汽8小时后)酒精自我给药的影响。另一组平行准备的大鼠被从酒精蒸汽中移除，然后进行14次的灭绝训练。一旦达到灭绝，大鼠接受SUV(0和5 mg/kg, p.o)，并测试足底休克应激诱导的酒精寻求行为恢复。Suvorexant在5、10和20 mg/kg剂量下选择性地降低了依赖大鼠的酒精摄入量。此外，5 mg/kg SUV仅能阻止依赖大鼠应激诱导的酒精寻求行为的恢复。这些结果强调了针对Orx系统治疗物质使用障碍的意义，并建议重新利用SUV可能是治疗AUD的另一种方法。

简介

酒精使用障碍(AUD)是最常见的物质使用障碍，每年有300万人死于酒精(格兰特等人，2004年，2015；亨特等人，2020年)．根据2019年全国药物使用和健康调查，仅在美国，它就成为可预防死亡的第三大原因¹在美国，12岁或12岁以上的人中有1450万人(占该年龄组的5.3%)患有澳元。其中包括900万男性(占该年龄段男性的6.8%)和550万女性(占该年龄段女性的3.9%)。AUD的治疗包括行为、心理社会和药理学方法，目标是减少饮酒并实现和保持长期戒酒(Witkiewitz等人，2019年)．只有三种药理化合物已被美国食品和药物管理局(FDA)批准用于治疗AUD:双硫仑(乙醛脱氢酶抑制剂)，acamproate(可作为一种药物)N-甲基- d -天冬氨酸受体激动剂)和纳曲酮(非特异性阿片受体拮抗剂;罗斯纳等人，2010年；Maisel等，2013；Witkiewitz等人，2019年)．这些药物对一部分AUD患者有效，这些化合物的开发和应用有助于提高我们对AUD药物治疗的总体理解，但必须继续探索和测试替代药理学途径，以治疗更大比例的AUD患者。

食欲素(Orx;下丘脑神经肽系统(也称为下丘脑泌素)已成为开发aud特异性治疗方法的兴趣系统(摩尔人,2018)．长期以来，人们都知道食欲素参与调节广泛的生理过程，包括唤醒、进食、能量消耗和与压力相关的行为(de Lecea等人，1998年；樱井等，1998年；Sutcliffe和de Lecea, 2000年；Mieda和Yanagisawa, 2002；贝里奇等人，2010年；Teske等人，2010年)．最近，Orx系统除了消极行为外，还涉及高度动机行为，这些行为一起可能是酗酒问题的基础(劳伦斯,2010；马勒等人，2012年；布朗和劳伦斯，2013；Barson和Leibowitz, 2016；沃克和劳伦斯，2017年；摩尔人,2018；Matzeu和Martin-Fardon, 2021)．虽然缺乏临床研究，但一些证据表明AUD患者的Orx系统调节异常。例如，被诊断为AUD的个体在早期戒断期间表现出高水平的Orx (Bayerlein et al.， 2011；Ziolkowski等人，2016)．重要的是，这些Orx水平升高与同一时间戒断期间的应激相关症状相关(冯·德·戈尔茨等人，2011)．

我们对Orx系统及其对酒精依赖的具体贡献的大部分了解都来自临床前研究。研究表明，当Orexin被注射到伏隔核核心而不是壳时，它会促进过度饮酒(Schneider et al.， 2007；布朗等人，2013)、腹侧被盖区，但不包括黑质(Srinivasan等人，2012)，以及室旁丘脑前部(而非后部)(Barson等人，2015)．在饮酒行为中，促食欲素细胞被强烈招募。例如，在AUD的啮齿动物模型中，在酒精相关辨别线索诱导的酒精寻求恢复过程中，观察到Orx神经元的激活增加(达亚斯等人，2008年)、离散线索(穆尔曼等人，2016)、与酒精有关的内容(哈姆林等人，2007年；米兰等人，2010年)和压力(育亨宾;Kastman等人，2016)．

Orx系统参与饮酒和寻找酒精已经通过Orx受体1 (OrxR1)和OrxR2的药理学操作得到证实。在高酒精偏好的Sprague Dawley大鼠中，OrxR1的系统性封锁减少了两瓶选择模式下的酒精饮酒量(穆尔曼和阿斯顿-琼斯，2009年)，在操作性固定比例计划下，酒精自我管理能力下降(劳伦斯等人，2006年；理查兹等人，2008；穆尔曼等人，2017年)，以及在渐进比例计划下减少酒精自我管理(朱普等人，2011)．全身给药OrxR1拮抗剂减少了酒精相关刺激诱导的酒精寻求行为(劳伦斯等人，2006年；马丁-法顿和韦斯，2014年；穆尔曼等人，2017年)和降低压力(育亨宾)诱导的酒精寻求恢复(理查兹等人，2008)．外周给药OrxR2拮抗剂可减少大鼠酒精的自我给药，但不影响糖精的自我给药(Shoblock等人，2011年)．在酒精偏好大鼠中，在循序渐进的比例计划下，全身给药双食欲素受体拮抗剂(DORA)减少了断点和酒精摄入量(安德森等人，2014)．

根据文献，关于Orx系统和酒精依赖之间的关系，可以得出两个一般性的观察结果:(i)暴露于酒精中强烈地招募Orx系统，(ii)阻断Orx受体(OrxR1, OrxR2和两者)减少酒精的使用。最近人们对重新利用fda批准的DORA suvorexant (SUV)产生了兴趣，该药物由默克公司(Merck)销售，名为Belsomra^®，用以治疗失眠症(詹姆斯等人，2017；坎贝尔等人，2020b)．除了减少药物渴望(主要是通过OrxR1)， SUV可能有额外的好处，通过使睡眠障碍(主要通过OrxR2)正常化，间接降低复发风险，这些障碍通常在AUD患者中观察到(Koob和Colrain, 2020年出版)．

AUD的特征之一是显著增加饮酒量(大量饮酒)以缓解或避免戒断症状(Koob和Colrain, 2020年出版)．此外，知道压力是一个主要因素，有助于药物使用障碍的慢性复发和强迫性，包括AUD (斯蒂芬斯和Wand, 2012年)，本研究的目的是测试SUV对AUD的两个方面的影响:(i)酒精依赖大鼠酒精消耗量的增加和(ii)压力诱导的酒精寻求恢复。

材料与方法

动物

共有32只雄性Wistar大鼠(Charles River Laboratories, Hollister, CA, USA)，到达时体重150-170克，每笼两只，在一个湿度和温度可控的饲养室内，按12/12小时的反光/暗循环(上午8:00关灯，晚上8:00开灯)，免费提供食物和水。在实验开始前，给大鼠1周时间来适应房屋和操作条件。所有的行为程序都是在黑暗周期(即上午8:00到晚上8:00之间)进行的。所有动物实验都严格遵守美国国立卫生研究院的规定《实验动物护理和使用指南》（国家研究委员会，2013年),动物研究:活体实验报告指南（Percie du Sert等人，2020)．动物程序得到了斯克里普斯研究所机构动物护理和使用委员会的批准。

药物

Suvorexant (Belsomra^®；默克公司，Whitehouse Station, NJ, USA)药丸(20 mg)被压碎并溶解在维生素E TPGS (D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸;Mazuri, Richmond, IN, USA) 20%溶液(考克斯等人，2010；郭等，2013；Ehlers等人，2020年)．均质后，为最大限度地提高化合物的生物利用度，在5ml /kg的体积内口服SUV，剂量为0、5、10和20mg /kg。0毫克SUV剂量只包括用于溶解SUV的载体。

酒精自我管理培训

如先前报告所述，进行了酒精自我管理培训(Matzeu和Martin-Fardon, 2020年；弗洛雷斯-拉米雷斯等人，2022)．值得注意的是，不需要糖精或蔗糖褪色程序来诱导自愿饮酒。在1周的房屋适应期及余下的训练程序后(图1一个)，大鼠在标准操作性条件反射室(29 × 24 × 19.5 cm;医生协会，圣奥尔本斯，VT，美国)在每天30分钟的自我管理会议(为期3周;图1一个)，在固定比例1 (FR1)的强化计划中，在右侧杠杆上的反应导致了0.1 ml 10% (w/v)酒精(从95% w/v酒精的自来水中配制)的输送，并在杠杆上方短暂(0.5秒)照明提示灯。记录了左不活动杠杆上的反应，但它们没有导致编程后果。

图1

图1所示。实验过程时间表。(一)雄性Wistar大鼠进行为期3周的酒精自我给药(SA)训练。训练完成后，记录基线躯体戒断症状。(B)在急性戒断期间(周三关闭蒸汽8小时后)对大鼠进行躯体戒断体征评分，并在慢性间歇性酒精蒸汽暴露的第1周至第3周期间，在酒精蒸汽关闭前30分钟(周四)记录血液酒精水平。(C)在慢性间歇性酒精蒸汽暴露的第4周至第6周期间，在急性禁欲期间(酒精蒸汽关闭后8小时)，大鼠每周进行三次自我管理会议(周一、周三和周五)。(D)越野车对酒精自我管理的影响。在第7至9周期间，一组大鼠在急性戒断点接受了所有剂量的SUV(0、5、10和20 mg/kg)的测试，每隔一段时间采用拉丁方设计随机排序。在两次测试之间的日子里，大鼠进行了定期的自我给药疗程，没有SUV。(E)SUV对压力诱导的酒精寻求行为恢复的影响。在诱导依赖的第6周后，另一组大鼠被从酒精蒸汽中移除，并每天进行消失疗程。一旦实现了消除，大鼠进行了间歇性足底休克应激诱导的酒精寻求行为恢复测试。BAL，血液酒精含量;EXT,灭绝;SA,自治制度;SUV, suvorexant;WDS，躯体退缩迹象;W,一周;Abst,禁欲。

慢性间歇性酒精蒸汽暴露

一旦自我给药训练(21次)完成，一半的大鼠(n都对酒精产生了依赖通过慢性间歇性酒精蒸汽暴露，另一半只暴露在空气中(n= 16;non-dependent集团)。依赖诱导期间(6周;图1一个)，大鼠每天循环14小时的酒精蒸汽，10小时的酒精蒸汽。使用气相色谱-顶空血液分析仪(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)测量血液酒精水平(BALs)。血液酒精含量(BALs)在150 ~ 250mg %之间。在3周内，大鼠保持不受干扰，除了在蒸汽暴露的最后30分钟内(周四)测量bal值，并每周一次(周三;图1 b)．戒断的行为迹象由实验室助理测量，他对实验条件一无所知，使用的量表改编自一份原始报告Macey et al. (1996)．这些戒断症状包括腹内侧肢体回缩、发声(即触摸烦躁)、尾巴僵硬、步态异常和身体颤抖。根据严重程度，每一种行为都被分为0 - 2分:0 =没有迹象，1 =中度，2 =严重。为了确认酒精依赖并评估戒断严重程度，5个分数的总和(0-10)被用作定量测量。之所以采用这种方法，是因为众所周知，这种酒精依赖模型会导致大鼠的动机性和躯体性戒断症状(Vendruscolo和Roberts, 2014)．在最后一次训练前(第21天)测量基线戒断评分。在酒精蒸汽暴露的第4、5和6周时(图1 c)，在酒精蒸汽关闭8小时后，当血液和大脑中的酒精水平可以忽略不计时，动物进行30分钟的FR1酒精自我管理，每周进行三次(周一、周三和周五)。基线自我管理水平是通过平均最近三次自我管理培训获得的。暴露在空气中的动物(非依赖动物)在4-6周内接受了与依赖动物相同的BALs评估、戒断测试和酒精自我管理会议。

suv对酒精自我管理的影响

从慢性间歇性酒精蒸汽暴露的第7周开始(图1一个(左图)，SUV(0、5、10和20 mg/kg)对酒精自我给药的影响在一半大鼠(n= 16;图1 d)．Suvorexant在急性戒断点(关闭酒精蒸汽8小时后)开始自我给药前30分钟口服(p.o)。为了控制SUV剂量对自我给药可能的顺序影响，每隔一段时间，每只动物都使用拉丁方设计随机顺序测试所有剂量的SUV。在两次试验之间的日子里，大鼠进行了定期的自我给药，没有药物给药。

消失训练和压力诱导恢复

另一半大鼠(n= 16)，用于应力诱导恢复实验，并平行制备(见图1一个，右侧面板)。在6周的慢性间歇性酒精蒸汽暴露后，大鼠被移出酒精蒸汽室，开始3周的禁欲期(图1一个，右侧面板)。在这3周内，大鼠进行灭绝训练(每次30分钟，每周5次，共14次，超过3周;图1 e)．这些消除疗程与酒精自我管理疗程相同，但酒精被扣留。为了适应足底休克应激过程，大鼠在每次治疗前15分钟被放置在手术室。在这15分钟的时间结束时，两个杠杆都延伸到操作室，消失会议开始。

在最后一次灭绝训练后24小时，对大鼠进行了恢复足底休克应激诱导的酒精寻求行为的测试(图1一个，右侧面板)。具体来说，在测试前30分钟，给予大鼠SUV(0或5 mg/kg, p.o)，并保持不受干扰，直到放置在手术室并进行足电击应激(15分钟;可变间歇电足电击0.5 mA;持续时间，0.5 s;平均冲击间隔40 s;（Martin-Fardon等人，2000年；赵等，2006；Sidhpura等人，2010；Matzeu和Martin-Fardon, 2020年；弗洛雷斯-拉米雷斯等人，2022)．在足休克终止两分钟后，将杠杆伸入实验室内，并记录30分钟的反应。根据受试者间设计，每只动物仅使用车辆或5 mg/kg SUV进行一次测试。之所以选择5毫克SUV剂量，是因为在酒精依赖组大鼠中，发现它是减少酒精自我给药的最低有效剂量。

统计分析

使用双向重复测量方差分析(ANOVA)分析3周训练期间酒精自我管理的获得，分别以会话和杠杆(即主动与不主动)作为受试者内部和受试者之间的因素。自我给药训练期间的总酒精摄入量(g/kg)采用单向重复测量方差分析。以时间和酒精依赖为独立因素，采用双向重复测量方差分析分析慢性间歇性酒精蒸汽暴露期间(即基线与第4、5和6周)的自我给药情况。采用Kruskal-Wallis试验和Dunn试验分析了慢性间歇性酒精蒸汽暴露对躯体脱瘾症状的影响。以酒精依赖和治疗(即0 mg/kg vs. 5、10和20 mg/kg SUV)为方差来源，采用双向重复测量方差分析SUV对酒精自我管理的影响。最后，以酒精依赖(即非依赖vs.依赖)和治疗(即0 mg/kg SUV vs. 5 mg/kg SUV)为独立因素，采用双向方差分析分析应激性恢复。在anova中显著的相互作用和主要效应紧随其后的是Tukey因果测试。数据用均值+ SEM表示。的值p< 0.05为差异有统计学意义。使用Prism 8软件(GraphPad, San Diego, CA, USA)进行统计分析。

结果

酒精自我管理培训和升级

经过21次训练(30分钟/天)，所有大鼠均获得酒精自我给药(双向重复测量方差分析;时间:F_1651年= 1546,p< 0.05;杆:F_20651年= 2.01,p< 0.05;时间×杠杆相互作用:F_20651年= 9.67,p< 0.05;图2一个)．图基的多重比较事后测试证实，从第2阶段开始，主动杠杆按压明显高于非主动杠杆按压(p< 0.05)。此外，在21次训练期间，总摄入量保持稳定(p> 0.05;图2 b)．

图2

图2。在3周的训练中获得酒精自我管理的时间进程，在慢性间歇性酒精蒸汽暴露的第4-6周饮酒升级。(一)大鼠在21次训练中获得了自我管理能力。(B)在21次训练期间，酒精摄入量保持稳定。(C)在慢性间歇性酒精蒸汽暴露的第4-6周，酒精依赖组大鼠在活动杠杆上的反应数量显著增加。无活性杠杆反应未观察到差异。(D)在间歇性接触酒精蒸汽的第4-6周，酒精摄入量也增加了。(E)在急性戒断期间慢性间歇性酒精蒸汽暴露的第4-6周，观察到依赖大鼠的躯体戒断症状增加。数据用均值+ SEM表示。＊＊＊p与无活性杠杆相比< 0.05;＊p与各自基线相比< 0.05。声波测井,基线;W,一周。

在慢性间歇性酒精蒸汽暴露的第4、5和6周期间，酒精依赖大鼠在活动杠杆上的反应数量增加(p< 0.05, Tukey因果经双向重复测量方差分析后，试验与基线比较;时间:F_{3, 90}= 9.81,p< 0.05;酒精依赖:F_{1, 30}= 19.69,p< 0.05;时间×酒精依赖相互作用:F_{3, 90}= 7.69,p< 0.05;图2 c)．无活性杠杆反应无差异(p> 0.05;图2 c)．酒精摄入量也增加了，这是通过对周一、周三和周五记录的摄入量数据进行平均得出的。p< 0.05, Tukey因果经双向重复测量方差分析后，试验与基线比较;时间:F_{3, 90}= 2.95,p< 0.05;酒精依赖:F_{1, 30}= 21.15,p< 0.05;时间×酒精依赖相互作用:F_{3, 90}= 13.19,p< 0.05;图2 d)．

在第4周、第5周和第6周，酒精依赖大鼠在急性戒断点(蒸汽熄灭后8小时;pDunn检验与基线Kruskal-Wallis非参数检验< 0.05，χ²(7) = 88.69，p< 0.05;图2 e)．

suv对酒精摄入的影响

在诱导依赖6周后，评估SUV减少酒精自我给药的能力。在非依赖大鼠中，SUV预处理不影响酒精的自我给药，无论剂量如何。然而，在酒精依赖大鼠中，在5、10和20 mg/kg剂量下，SUV给药显著减少了主动杠杆上的反应数量(p< 0.05, Tukey因果试验与车辆的双向重复测量方差分析;剂量:F_{3, 39}= 44.33,p< 0.05;酒精依赖×剂量:F_{3, 39}= 5.85,p< 0.05;图3一)．重要的是，无论大鼠有酒精依赖史和/或SUV剂量，均未观察到无活性杠杆反应的差异(p> 0.05;图3一)．在评估酒精摄入量时，SUV的效果相似(p< 0.05, Tukey因果试验与车辆的双向重复测量方差分析;酒精依赖:F_1、13= 5.03,p< 0.05;剂量:F_{3, 39}= 15.46,p< 0.05;酒精依赖×剂量:F_{3, 39}= 9.62,p< 0.05;图3 b)．

图3

图3。SUV(0、5、10和20 mg/kg)对酒精自我给药的影响(一)在所有测试剂量下，SUV(5、10和20 mg/kg)均显著降低了依赖大鼠在活动杠杆上的反应数量，而对非依赖大鼠未产生任何影响。无活性杠杆反应未观察到差异。(B)同样，在所有测试剂量下，依赖大鼠的摄入量都减少了，而对非依赖大鼠没有产生任何影响。数据用均值+ SEM表示。＊p< 0.05 vs. 0 mg/kg。suvorexant SUV。

应激恢复

车况下(即0 mg/kg SUV;图4)压力促使非依赖和依赖大鼠都恢复了寻求酒精的行为。值得注意的是，尽管在两组中观察到的酒精寻求的恢复是相似的，但只有在有酒精依赖史的大鼠中，才可以通过给药5mg /kg SUV来防止酒精寻求的恢复(Tukey因果双因素方差分析检验;治疗:F_1、13= 11.69,p< 0.05;酒精依赖:F_2、13= 20.62,p< 0.05;治疗×酒精依赖相互作用:F_2、13= 4.52,p< 0.05;图4)．无论大鼠是否有酒精依赖史和/或治疗情况，均未观察到无活性杠杆反应的差异(p> 0.05;图4)．

图4

图4。SUV(0和5 mg/kg)对应激性酒精寻求行为恢复的影响间歇性足底休克应激诱发依赖组和非依赖组大鼠酒精寻求行为(0 mg/kg)运动型多酚能抑制依赖大鼠应激性酒精寻求恢复，但对非依赖大鼠无抑制作用。无活性杠杆反应未观察到差异。数据用均值+ SEM表示。＊p< 0.05，相对于各自的EXT;⁺p< 0.05, vs.各自5 mg/kg SUV。EXT,灭绝;suvorexant SUV。

讨论

本研究评估了fda批准的用于治疗失眠的药物SUV重新用于减少有酒精依赖史动物的酒精自我管理的能力。该研究还测试了SUV降低酒精依赖大鼠压力诱导的酒精寻求行为恢复的能力。在慢性间歇性酒精蒸汽暴露引起的酒精依赖期间，酒精依赖大鼠表现出酒精自我管理的增加(即升级)，这与先前的几项研究一致(O 'Dell等人，2004年；Vendruscolo和Roberts, 2014；Matzeu等人，2018a；Matzeu和Martin-Fardon, 2020年)．与先前的报告一致，暴露于间歇性足电击压力下可靠地恢复了先前熄灭的饮酒行为(Le et al.， 1999；Martin-Fardon等人，2000年；Matzeu和Martin-Fardon, 2020年；弗洛雷斯-拉米雷斯等人，2022)．值得注意的是，SUV仅在酒精依赖大鼠中显著降低了酒精自我管理能力。此外，SUV选择性地阻断了酒精依赖大鼠应激诱导的酒精寻求行为的恢复。这些结果支持了OrxR1和OrxR2在药物自我管理和药物寻求行为恢复中发挥重要作用的假设(Plaza-Zabala等人，2012年，2013；Uslaner等人，2014)，进一步表明Orx系统与适应不良动机有关，反映在依赖期间饮酒和寻求酒精的动机增加(穆尔曼和阿斯顿-琼斯，2009年；穆尔曼等人，2017年)．总而言之，这些结果强调了针对Orx系统治疗物质使用障碍的重要性，SUV可以被重新用于AUD的治疗。

在本研究中，酒精依赖大鼠在间歇性酒精蒸汽暴露的第4-6周内表现出酒精自我管理的增加和更大的躯体戒断症状。这些结果反映了有酒精依赖史的大鼠表现出酒精自我管理的增加(即升级)以及依赖特征的躯体和动机性戒断迹象，这些迹象在酒精蒸汽戒断6-8小时后可观察到(罗伯茨等人，1996年；O 'Dell等人，2004年；Vendruscolo和Roberts, 2014；Matzeu等人，2018a；Matzeu和Martin-Fardon, 2020年)．目前的结果增加了越来越多的文献，表明间歇性暴露于酒精蒸汽会引起依赖的行为和神经生物学迹象。一种解释是，神经行为系统的这些变化，特别是那些反应抑制和奖励和压力相关行为的变化，导致了高卡提feia，从而导致负强化，依赖对象寻求缓解在戒断酒精期间加剧的负症状，进一步激励他们寻求和服用酒精，特别是在压力增加的时候(Koob 2014)．

目前的研究结果表明，5、10和20 mg/kg SUV显著和选择性地降低了有酒精依赖史的大鼠的酒精自我管理能力，而不影响非酒精依赖大鼠的酒精摄入量。这些结果与之前的报告一致，即Orx系统的操作，通过OrxR1和OrxR2的药理阻断剂，影响啮齿动物的酒精消费(综述，见Kim et al.， 2012)．事实上，全身给药OrxR1拮抗剂SB334867减少了自愿的家庭酒精摄入量(穆尔曼和阿斯顿-琼斯，2009年；安德森等人，2014)和减少操作性自我管理(劳伦斯等人，2006年；理查兹等人，2008；朱普等人，2011)．同样，OrxR2拮抗剂LSN2424100降低了酒精偏好(P)大鼠和酒精偏好C57BL/6J小鼠的家庭笼酒精摄入量(安德森等人，2014)．此外，DORA almorexant (ACT-078573)在固定和渐进比例强化计划下减少了酒精自我管理，并减少了大鼠和小鼠在家中的饮酒(Srinivasan等人，2012；安德森等人，2014)．目前的研究结果，以及现有的文献，提供了进一步的证据，证明Orx系统在酒精依赖条件下酒精消费量的增加中起着重要作用。数据进一步表明，Orx系统失调是酒精暴露的一个功能，这可以通过SUV的选择性作用来证明，它仅在酒精依赖大鼠中降低了酒精自我管理能力。

在车辆条件下(即0 mg/kg SUV)，间歇性足底休克应激诱导非依赖大鼠和依赖大鼠的酒精寻求行为，强度相似，尽管酒精依赖大鼠在依赖诱导期间表现出更大的主动杠杆反应( $\bar{X}$ = 81±5 vs。 $\bar{X}$ = 46±4，分别在第6周)。重要的是，5 mg/kg SUV仅在依赖大鼠中防止应激诱导的酒精寻求行为的恢复。与目前的研究结果一致，以前的研究表明，周围(马丁-法顿和韦斯，2014年)和中央(边缘前皮层内)注射OrxR1拮抗剂SB334867可降低酒精相关刺激诱导的恢复(马丁-法顿和韦斯，2014年；布朗等人，2016)，并且全身给药SB334867也能减少育亨宾(应激)诱导的恢复(理查兹等人，2008)．最近，在丘脑室旁后核注射DORA TCS1102仅能阻止酒精依赖大鼠足电击应激诱导的酒精寻求行为恢复(Matzeu和Martin-Fardon, 2020年)．总之，这些发现表明，Orx系统在酒精寻求行为的动机方面起着关键作用，其目标受体的拮抗可能是逆转由酒精暴露引起的Orx失调的有效治疗方法。慢性酒精引起的Orx系统失调与急性戒断期间出现高血浆Orx水平的AUD患者的临床观察相一致(Bayerlein et al.， 2011；Ziolkowski等人，2016)，与情绪和压力相关症状的加重相关(冯·德·戈尔茨等人，2011)．

一个有趣的发现是，在酒精依赖的大鼠中，服用SUV选择性地减少了酒精的摄入和寻求。在不断扩大的Orx文献中，一个反复出现的主题是，OrxRs的药理学封锁对寻求酒精动机高或饮酒加剧(即酒精偏好或依赖诱导)的受试者更有效。例如，OrxR1拮抗剂的施用减少了被训练为表现出高酒精动机的大鼠的酒精自我管理和恢复行为(穆尔曼和阿斯顿-琼斯，2009年；穆尔曼等人，2017年)以及在具有高酒精偏好的大鼠中(劳伦斯等人，2006年；Dhaher等，2010；安德森等人，2014)．OrxR1阻断选择性地降低依赖小鼠的饮酒升级，但不影响非依赖小鼠(洛佩兹等人，2016年)，同时阻断OrxR1和OrxR2可以减少依赖大鼠的饮酒量，这与本研究一致(阿尔德里奇等人，2022年)．最终，我们小组最近的两项研究(Matzeu和Martin-Fardon, 2020年；弗洛雷斯-拉米雷斯等人，2022)还发现，朵拉对酒精寻求行为的影响在依赖动物身上比在不依赖动物身上更强烈。对这一现象的一种可能解释是，在反奖励系统充分参与或招募之前，Orx传递对饮酒和压力诱导的酒精寻求的动机方面的独特贡献并没有发挥重要作用。因此，在有高度饮酒动机的动物(例如，酒精依赖动物)中，Orx的传播可能受到损害，并通过负强化机制促进了饮酒和寻求的动机。总的来说，这些发现可能具有重要的临床意义。在已被诊断为AUD的患者中，用SUV治疗可能有助于减少酒精渴望和复发。

虽然Orx只产生于下丘脑(HYP)，包括外侧HYP，背内侧HYP和穹窿周围区域(Baldo等人，2003年；DiLeone等人，2003年；Winsky-Sommerer等人，2004年)， Orx神经元投射到整个大脑，密集地支配着涉及觉醒、动机和对压力相关刺激的反应的一系列大脑区域(Peyron等人，1998年；Baldo等人，2003年；Grafe和Bhatnagar, 2018)．尽管了解Orx系统如何影响强迫性饮酒和寻求酒精的动机过程的系统方法已经取得了成功，但揭示谨慎的大脑区域的独特贡献也很重要。先前的研究表明，OrxR1在腹侧被盖区(VTA)的阻断降低了线索诱导的酒精寻求恢复(布朗等人，2016)，并且vta内的DORA给药减少了酒精自我给药(Srinivasan等人，2012)．此外，内侧前额叶皮层中的定向OrxR1阻断降低了提示诱导的酒精反应恢复，伏隔核壳中的OrxR1阻断降低了酒精自我给药(雷等，2016)，当阻滞发生在侧侧HYP时，寻求酒精的行为减少(坎贝尔等人，2020a)．在杏仁核中央核直接注射OrxR2拮抗剂可减少小鼠的酒精摄入量(奥尔尼等人，2017年)，而将朵拉TCS1102输注于丘脑室旁后核可防止应激诱导的酒精寻求行为的恢复(Matzeu和Martin-Fardon, 2020年)．这些发现表明，Orx系统在整个大脑区域的活动是调解与酒精摄入和寻求相关行为的关键。目前的研究只是系统地使用SUV，但上述大脑区域可能发挥着重要作用，这需要进一步的测试来描绘SUV行为影响的确切解剖结构和网络基础。

本研究的一个局限性是我们的实验设计中没有包括雌性大鼠，这限制了结果的泛化性。文献表明，在两瓶选择测试中，酒精摄入量和偏好的性别差异已得到证实(李和卢蒙，1984；Blanchard等人，1993年；沃克等人，2008年)，间歇性酒精蒸汽暴露时，自我给药后BALs和躯体戒断症状的差异(Matzeu等人，2018b)，以及对酒精的奖励性和厌恶性反应的差异(Torres等人，2014年)．此外，食欲素也被发现在应激反应中调节性别依赖效应(格拉夫等人，2017)．未来的研究应阐明SUV对酒精摄入和寻求的可能的性别特异性影响。本研究的另一个可能的局限性是用于测试SUV对压力诱导的酒精寻求行为恢复的大鼠数量相对较少(n= 4 /剂量)。尽管存在这样一种可能性，即大量的大鼠可能会产生不同的结果，但我们实验室之前的研究反对这种可能性。事实上，研究表明，另一种朵拉TCS1102在减少有酒精依赖史的大鼠压力诱导的酒精寻求行为恢复方面更有效(Matzeu和Martin-Fardon, 2020年；弗洛雷斯-拉米雷斯等人，2022)，强烈支持针对OrxR1和OrxR2的有益作用，以防止AUD患者的压力诱导的渴望和复发。服用SUV治疗失眠症的患者应在就寝前服用该药物，并建议不要饮酒，因为酒精可能会增加嗜睡的风险(孙等，2015)．因此，一个重要的问题是，在一天中的什么时候服用SUV对治疗AUD最有效，并最大限度地减少日间嗜睡。在这种背景下，已经开始了一些与SUV相关的临床试验(即ClinicalTrials.gov识别码:NCT04229095和NCT03897062)和进一步的临床研究，以确定对遭受AUD的患者使用SUV的最安全的方法。

总之，目前的研究结果表明，在有依赖史的动物中，目前fda批准的治疗失眠的SUV的管理，选择性地减少了酒精自我管理和压力诱导的酒精寻求行为的恢复。目前的结果强调了针对Orx系统治疗物质使用障碍的重要性，并表明重新利用SUV可能是治疗AUD的一个很好的替代方案，以防止强迫性饮酒和压力诱导的渴望和复发。

数据可用性声明

本文/补充资料中包含了本研究中提出的原始贡献，进一步查询可向通讯作者咨询。

道德声明

该动物研究由斯克里普斯研究所的机构动物护理和使用委员会审查和批准。

作者的贡献

RM-F构思了这项研究。RM-F和BM设计了这项研究。FF-R, JI, GP和AM执行实验程序，分析结果，并创建图形。所有作者共同撰写了稿件，参与了数据解读、稿件编辑和审定。

资金

这项工作得到了国家酒精滥用和酒精中毒研究所的支持(授予RM-F AA026999和AA028549号，授予RM-F和BM AA006420号，授予FF-R和JI AA007456号)。

致谢

这是斯克里普斯研究所的30202号出版物。作者感谢迈克尔·阿伦兹对手稿的校对。

利益冲突

作者声明，这项研究是在没有任何商业或财务关系的情况下进行的，这些关系可能被解释为潜在的利益冲突。

出版商的注意

本文中所表达的所有主张仅代表作者，并不代表他们的附属组织，也不代表出版商、编辑和审稿人。任何可能在本文中评估的产品，或可能由其制造商提出的声明，都不得到出版商的保证或认可。

脚注

＾https://www.niaaa.nih.gov

参考文献

Aldridge, g.m.， Zarin, t.a.， Brandner, a.j.， George, O.， Gilpin, n.w.， Repunte-Canonigo, V.等(2022)。单、双下丘脑泌素受体阻断或抑制中央杏仁核下丘脑泌素投射对依赖雄性大鼠饮酒的影响成瘾者。>。3:100028。doi: 10.1016 / j.addicn.2022.100028