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原始研究的文章gydF4y2Ba

前面。食物。科学。抛光工艺。,12January 2023
秒。食品生物技术gydF4y2Ba
卷2 - 2022 |gydF4y2Ba https://doi.org/10.3389/frfst.2022.1108043gydF4y2Ba

纤维素酶的影响,gydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba在发酵质量、微生物多样性、基因功能预测,gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba瘤胃发酵参数gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料gydF4y2Ba

www.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2Ba霁居gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba,gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2Ba簋街上张gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2Ba明肖gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2BaChenyang董gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2BaRunze张gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2Ba刘杜gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2BaYongjie郑gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2BaManli魏gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2BaManlin魏gydF4y2Ba1gydF4y2Ba*和gydF4y2Bawww.雷竞技rebatfrontiersin.orggydF4y2BaBaiyila吴gydF4y2Ba1gydF4y2Ba*gydF4y2Ba
  • 1gydF4y2Ba动物科学与技术学院、内蒙古民族大学,通辽市,中国gydF4y2Ba
  • 2gydF4y2Ba农业大学、宁夏大学、银川、中国gydF4y2Ba

在目前的研究中,我们调查了纤维素酶的影响gydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba)发酵质量、微生物多样性、基因功能预测,gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba瘤胃发酵参数gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba(gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。实验治疗组包括控制(CK)、纤维素酶(C),gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba(L)和纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba(CL)。一式三份筒仓在14和56天的保藏后取样。微生物的多样性gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料在使用Illumina公司MiSeq测序技术分析了56天,和所带来的影响gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料在瘤胃发酵进行评估的gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba人工瘤胃天然气生产方法。结果表明,添加纤维素和gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba治疗降低氨氮(NH)gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n)、干物质(DM)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维含量在保藏期间。与CK组相比,高乳酸含量青贮饲料中可观察到的C和L组,但CL组有较高的醋酸(AA)的内容。与CK组相比,相对丰富的gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba显著增加,但gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Ba,gydF4y2BaWeissellagydF4y2Ba,gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba,gydF4y2Ba片球菌属gydF4y2Ba所有其他组除C组明显减少(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。基因功能预测的结果如下:丙酮酸激酶,1-phosphofructokinase,果糖激酶和乳酸生产酶,协会建议的AA含量高到CL组的高丰富- 6 -磷酸葡萄糖脱氢酶。丰富的H +运输atp酶和腺苷磁带(ABC)转运蛋白L和CL组高于CK组。多酮类化合物和萜类化合物代谢、错配修复DNA复制,核苷酸切除修复、同源重组增加CL组与CK相比。与CK组相比,NHgydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n和微生物蛋白质含量和DM、NDF降解率增加L和CL组。最后,L和CL组增加了gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba丰富、提高发酵质量和DM降解率高与CK相比。gydF4y2Ba

介绍gydF4y2Ba

最近,高饲养成本,因为饲料资源和不平衡季节性供应短缺是一个重要因素,限制了反刍动物养殖的快速发展在中国。因此,开发非常规饲料资源是解决这个问题的关键。gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba(gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba)是一种多年生落叶灌木与华丽的分支,发达的根系,快速增长,高覆盖率和固氮能力(gydF4y2Ba田和毛泽东,2007gydF4y2Ba;gydF4y2Ba任et al ., 2015gydF4y2Ba)。人工种植的区域gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba不断增长的中国北方的荒芜地区。超过10000人嗯gydF4y2Ba2gydF4y2Ba人工gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba每年都增加了。据统计,总面积gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba内蒙古种植园> 400万嗯gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,生物年产量估计> 600万吨基于年度1.5 t / hm的干重gydF4y2Ba2gydF4y2Ba(gydF4y2BaZhang et al ., 2010 agydF4y2Ba),它提供了足够的资源的开发gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba饲料。然而,随着期限的延长,木质化程度的增加和适口性降低,使动物很难消化饲料。因此,直接喂食经常失去价值。gydF4y2Ba

青贮饲料是一种常见的手段提高粗饲料的质量。它有利于改善的适口性和营养品质gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba。青贮饲料添加剂被广泛使用,其中微生物接种和细胞壁降解酶是用来降低干物质(DM)发酵过程中损失,营养损失。占主导地位的细菌在青贮饲料乳酸菌(实验室),具有竞争或协同效应在其他微生物(gydF4y2Ba白et al ., 2021gydF4y2Ba;gydF4y2Ba吴et al ., 2022gydF4y2Ba)。实验室有不同的类型和数字对青贮饲料的发酵质量的影响。gydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba)是一种最常用的实验室在青贮饲料。gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba将可溶性碳水化合物在青贮饲料转化为有机酸、pH值降低,改变了微生物群落,抑制有害细菌的生长,延长储存时间在地窖里贮存期间(gydF4y2Ba王问:et al ., 2022gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba李et al。(2022)gydF4y2Ba证明实验室的天然草皮改善青贮饲料的发酵质量的结构通过改变细菌社区。gydF4y2Ba子et al。(2021)gydF4y2Ba发现的gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba大大降低pH值、乙酸(AA)、丙酸(PA)和氨氮含量王草青贮饲料和显著增加乳酸(LA)的内容。另外,纤维素酶,酶作为一种高效添加剂,可以在青贮饲料发酵,可吸收降解纤维素糖,导致降解纤维组件和青贮饲料发酵性能增加。此外,纤维素酶可以促进发酵生产的实验室,大大降低pH值,提高发酵效率,增加在发酵过程中营养价值(gydF4y2Ba神气活现的et al ., 2018gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba胡锦涛et al。(2020)gydF4y2Ba显示,添加纤维素酶提高了发酵质量和增加有益的细菌(gydF4y2Ba乳酸菌gydF4y2Ba)丰富的苜蓿青贮饲料。因此,纤维素酶和gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba能有积极的效果在改善青贮饲料的品质。gydF4y2Ba

添加剂的应用(实验室和纤维素酶)改善青贮饲料的营养价值和反刍动物的瘤胃消化。有趣的是,瘤胃微生物降解饲料基质产生大量的甲烷(CHgydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。CHgydF4y2Ba4gydF4y2Ba也不仅排放导致全球变暖,导致浪费大量饲料能量。瘤胃的CHgydF4y2Ba4gydF4y2Ba可以减少生产改善瘤胃发酵底物的营养特点和调控瘤胃微生物。一些研究表明,棕榈叶和紫花苜蓿青贮饲料纤维素酶处理gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba减少瘤胃CHgydF4y2Ba4gydF4y2Ba排放,改善瘤胃降解率的DM和纤维(gydF4y2BaZhang et al ., 2022 agydF4y2Ba;gydF4y2BaKholif et al ., 2022gydF4y2Ba)。此外,gydF4y2Ba陈et al。(2022)gydF4y2Ba表明,苜蓿青贮饲料处理gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba还可以抑制瘤胃CH的生产吗gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,这有利于改善瘤胃能量分布和降低饲料消耗。gydF4y2Ba

因此,在这项研究中,我们旨在研究纤维素酶的影响gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba在发酵质量、微生物多样性、基因预测16 s rRNA的功能特点,gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba瘤胃发酵参数和瘤胃发酵的温室气体排放gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。这些发现提供了见解和细菌社区gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba瘤胃发酵过程gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。gydF4y2Ba

材料和方法gydF4y2Ba

青贮饲料的制备gydF4y2Ba

抽样地点位于中国内蒙古民族大学试验田。的gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba样品用于本研究收集2021年7月12日。的gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba样本枯萎412.97克/公斤的DM在室内空气通风4 h,然后切碎与作物切割器10 - 20毫米的长度。充分混合后的养分含量决定茎和叶(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。纤维素酶(Longkete有限公司、山东、中国)获得gydF4y2Ba木霉gydF4y2Ba与endo-β-1 4-glucanases活动≥15000 IU / g。gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba(6026号)是孤立的gydF4y2Ba羊草gydF4y2Ba青贮饲料。实验治疗组包括控制(CK)、纤维素酶(C),gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba(L)和纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba(CL)。20毫克/公斤的纤维素酶添加C组(鲜重),接种量的gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba1×10 L组gydF4y2Ba6gydF4y2Bacfu / g(新鲜样品的基础上),和CL组添加20毫克/公斤纤维素酶+ 1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Bacfu / ggydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba(新鲜样品的基础上)。等量的蒸馏水是添加到CK组。最后从每组混合(300克)被挤在塑料袋装(将250×350毫米;Wangnuo、北京、中国)使用商业真空封口机(zk - 320;中国,北京,Ouxin)。一式三份青贮准备每个治疗和筒仓是储存在室温下(25°印度°C) 14和56天,分别。gydF4y2Ba

表1gydF4y2Ba
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表1gydF4y2Ba。化学成分的pre-ensilinggydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

发酵产品和化学成分分析gydF4y2Ba

确定pH值、有机酸和北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n的内容,每个样本(20 g)均质杀菌水(180毫升)在搅拌机1分钟,其次是使用膜过滤(0.22µm)。玻璃电极pH计(sx - 620,鑫、上海、中国)是用来测量pH值的均相混合。总共2毫升的滤液被离心纯化12000×gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C 15分钟来确定有机酸和北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n含量和洛杉矶的内容,AA, PA通过高效液相色谱法测定(Shodex RS Pak kc - 811,昭和电工株式会社、川崎、日本;检测器:RID10A,日本岛津公司有限公司,京都,日本;洗脱液:0.1%磷酸,1.0毫升分钟gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba;温度:40°C)。北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n含量是决定使用gydF4y2Ba布罗德里克和康(1980)gydF4y2Ba方法。gydF4y2Ba

新鲜的材料不断干在65°C的干燥箱48 h恒重,和DM决定内容。干样本地面使用威利机1毫米筛(ZM200 Retsch GmbH)来确定化学成分。粗蛋白(CP)内容确定了使用标准的官方分析化学家协会(gydF4y2Ba采用AOAC公认的,1990gydF4y2Ba)程序。中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)使用方法所描述的内容被量化gydF4y2Ba范所以et al。(1991)gydF4y2Ba和水溶性碳水化合物(WSC)内容由phenol-sulfuric酸试验(gydF4y2Ba吴Nishino, 2016gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

在体外gydF4y2Ba一批文化gydF4y2Ba

对青贮饲料样品在65°C和地面使用烘干的威利1毫米筛机。权衡之后,220毫克的干青贮饲料加入100毫升玻璃瓶与丁基橡胶瓶塞和Hungate螺钉帽。5每青贮饲料样品瓶,20瓶为每个青贮饲料进行治疗。20毫升的缓冲溶液的体积(pH值6.85,gydF4y2BaMenke Steingass, 1988gydF4y2Ba)和10毫升的过滤瘤胃液体收集从三个rumen-fistulated肉牛(西门塔尔牛)被添加到瓶1 h在早上喂。通过添加N瓶子被清除gydF4y2Ba2gydF4y2Ba5 s和丁基橡胶塞密封,Hungate螺钉帽。所有瓶子都孵化39号为0°C, 2、4、8、12、24、36岁,48岁,60岁,72 h,实验进行了一式三份。孵化72 h后,发酵肉汤收集来确定和NH pH值gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n和微生物蛋白(MCP)的内容。pH值和北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n含量的发酵肉汤根据上述方法测定。MCP水平测定gydF4y2BaMakkar医生et al。(1982)gydF4y2Ba方法。DM降解率(DMD)、NDF降解率(NDFD)和ADF退化率(ADFD)测量使用描述的方法gydF4y2BaZhang et al。(2017)gydF4y2Ba。采样袋(100毫升)的铝箔被用来不断从每个玻璃瓶收集气体。使用气相色谱法测量气体成分(热,跟踪1300)配备了一个毛细管柱(安捷伦HP-INNOWAX 30米×0.25毫米×0.25µm)。NgydF4y2Ba2gydF4y2Ba作为载气,流量被设定为1毫升/分钟。gydF4y2Ba

微生物群落分析gydF4y2Ba

冷藏青贮饲料(10克)是混合2 h与无菌磷酸盐在120 rpm(40毫升;pH值7.4)使用电子振荡器。样本然后使用两层纱布过滤口罩。滤液是离心机在4°C和13000×10分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba。上层清液被删除,保存在干冰颗粒。宏基因组测序,包括DNA提取和聚合酶链反应扩增,其次是Illumina公司MiSeq测序和最后的测序数据处理,完成了Majorbio Bio-Pharm科技有限公司(上海,中国)。UPARSE 7.1版本用于集群操作分类单位97%(辣子鸡)相似性阈值(gydF4y2Ba埃德加,2013gydF4y2Ba)。嵌合序列的识别和消除后,核糖体数据库项目分类器(2.2版)是用于分类分析的典型OTU序列对16 s rRNA数据库,如席尔瓦v138,置信度为0.7 (gydF4y2Ba杨et al ., 2019gydF4y2Ba)。代谢的潜在的细菌群落及其组成功能基因被分配假设16 s rRNA标记基因序列测序基因组功能注释的基于基因和基因组的京都百科全书(KEGG)在第一,第二,第三通路水平,使用Tax4Fun(0.3.1版),所描述的gydF4y2BaAßhauer et al。(2015)gydF4y2Ba。测序数据生成在这项研究已经存入国家生物技术信息中心序列读取存档数据库下加入PRJNA909496数量。gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

数据统计分析使用约翰的麦金塔项目13个版本软件(SAS研究所、日本)和双向方差分析(方差分析),添加剂和存储时间为主要因素。评价治疗效果,单向方差分析和后续图基进行了基于多重比较。天然气总产量的数据有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba生产、CHgydF4y2Ba4gydF4y2Ba生产,gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba发酵是用于执行单向方差分析gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

化学成分和发酵的产物gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料后14和56天的保藏gydF4y2Ba

添加剂的影响,在地窖里贮存的化学成分gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料所示gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba。与CK组相比,C和CL组显著降低DM内容后56天的保藏(gydF4y2Bap 0.05)。经过14,56天的保藏,CP L和CL组显著增加(内容gydF4y2Bap 0.05)以上的CK组。在地窖里贮存14天之后,与CK组相比,C和L组NDF和ADF含量没有显著差异(gydF4y2Bap >gydF4y2Ba0.05),而在CL组显著降低(gydF4y2Bap 0.05)。56天的在地窖里贮存后,L和CL组NDF和ADF含量显著减少与CK相比集团(gydF4y2Bap 0.05)。WSC含量最高CL组后56天的保藏。gydF4y2Ba

表2gydF4y2Ba
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表2gydF4y2Ba。纤维素酶的影响,gydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba的化学成分gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料。gydF4y2Ba

添加剂的影响,在地窖里贮存时间的发酵产品gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料所示gydF4y2Ba表3gydF4y2Ba。pH值和NHgydF4y2Ba3gydF4y2Ba在地窖里贮存期间- n含量显著下降(gydF4y2Bap 0.05)。14天之后,与CK组相比,洛杉矶内容在所有其他组显著增加(gydF4y2Bap 0.05),56天后,洛杉矶C和L组显著增加(内容gydF4y2Bap 0.05),而在CL组显著降低(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。有趣的是,AA含量最高CL组后56天的保藏。gydF4y2Ba

表3gydF4y2Ba
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表3gydF4y2Ba。纤维素酶的影响,gydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba在发酵的产物gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料。gydF4y2Ba

纤维素酶的影响,gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba在微生物多样性gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料gydF4y2Ba

高通量测序分析的V3和V4地区16 s rRNA 639131有效样本生成序列的基因。根据gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba基于数量的辣子鸡,降序排列的四组CL > CK > C > L .核心辣子鸡是44岁的和独特的辣子鸡的数量在L, C, CL,和CK组15日18日19日分别和32。gydF4y2Ba

图1gydF4y2Ba
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图1gydF4y2Ba。维恩图解操作分类单位分布。gydF4y2Ba

在gydF4y2Ba表4gydF4y2Ba,样品所覆盖的值约为0.99,表明测序结果准确地反映微生物群落的特征。香农指数L和CL组下降与CK组相比,而辛普森指数显著增加(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。曹国伟和ACE指数没有显著差异在所有的组(gydF4y2BapgydF4y2Ba> 0.05)。gydF4y2Ba

表4gydF4y2Ba
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表4gydF4y2Ba。的微生物α-diversitygydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料后56天的保藏。gydF4y2Ba

主成分分析(PCA)显示细菌群落组成的变化在不同的治疗组(gydF4y2Ba图2gydF4y2Ba)。PC1和PC2占总变异的24.38%和14.55%,分别。微生物群落聚集显著CK、C、L, L CL组但更紧密地和CL团体与CK相比集团(ANOSIM基于Bray-Curtis距离,R = 0.69,gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.003)。因此,纤维素酶和gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Baβ-diversities和群落结构的影响gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。gydF4y2Ba

图2gydF4y2Ba
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图2gydF4y2Ba。主坐标分析(PCoA)的微生物群落gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料不同的新的选择。gydF4y2Ba

图3gydF4y2Ba显示了微生物群落gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料的门、家人和属的水平。gydF4y2Ba厚壁菌门gydF4y2Ba和gydF4y2Ba变形菌门gydF4y2Ba的主要类群gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料(gydF4y2Ba图3一gydF4y2Ba)。主要包含的CK和C组gydF4y2Ba厚壁菌门gydF4y2Ba(分别为75.20%和76.74%)gydF4y2Ba变形菌门gydF4y2Ba(分别为24.69%和23.17%)。gydF4y2Ba厚壁菌门gydF4y2BaL和CL组占97%以上的检测序列。占主导地位的家庭gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料是gydF4y2Ba乳杆菌科gydF4y2Ba(gydF4y2Ba图3 bgydF4y2Ba)。主要包括CK和C组gydF4y2Ba乳杆菌科gydF4y2Ba(分别为51.17%和53.72%),gydF4y2Ba肠杆菌科gydF4y2Ba(分别为24.52%和23.05%),gydF4y2BaEnterococcaceaegydF4y2Ba(分别为21.62%和17.81%)gydF4y2BaLeuconostocaceaegydF4y2Ba(分别为1.85%和2.86%)。gydF4y2Ba乳杆菌科gydF4y2Ba丰富L和CL组是98.25%和97.27%,分别。在属级,所有的组gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料是由gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba(gydF4y2Ba图3 cgydF4y2Ba)。主要包括CK和C组gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba(分别为40.75%和40.76%),gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Ba(分别为21.51%和17.84%),gydF4y2Ba片球菌属gydF4y2Ba(分别为10.44%和12.90%),gydF4y2BaWeissellagydF4y2Ba(分别为1.85%和2.80%)gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba(分别为23.87%和22.11%)。主要是由L和CL组gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba(分别为98.10%和97.19%)。LEfSe多级物种差异分析(LDA = 4)的微生物群落gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料透露,两个门,两个订单,两个类,7科8属不同大大丰富的组织(gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

图3gydF4y2Ba
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图3gydF4y2Ba。gydF4y2Ba(一)gydF4y2Ba门,gydF4y2Ba(B)gydF4y2Ba家庭,gydF4y2Ba(C)gydF4y2BaGenus-level微生物社区gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料;CK,没有添加剂;C,纤维素酶;lgydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba);和CL,纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

图4gydF4y2Ba
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图4gydF4y2Ba。判别分析的LEfSe多级不同gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料;CK,没有添加剂;C,纤维素酶;lgydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba);和CL,纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

KEGG代谢途径和关键酶活性的微生物群落gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料gydF4y2Ba

图5gydF4y2Ba说明了16 s rRNA基因预测的功能映射第一(gydF4y2Ba图5一个gydF4y2Ba)和二(gydF4y2Ba图5 bgydF4y2Ba)通路水平和碳水化合物(gydF4y2Ba图5 cgydF4y2Ba)和氨基酸(gydF4y2Ba图5 dgydF4y2Ba)新陈代谢。后56天的保藏,新陈代谢和环境和KEGG代谢途径的基因信息处理明显高于其他代谢途径(gydF4y2Ba图5一个gydF4y2Ba)。代谢途径的膜运输和碳水化合物的新陈代谢,核苷酸和氨基酸远高于其他代谢途径(gydF4y2Ba图5 bgydF4y2Ba)。碳水化合物代谢途径在第三个途径进行了具体分析。三羧酸循环(柠檬酸循环)和丙酮酸、乙醛酸,dicarboxylate新陈代谢CL组明显高于CK组(gydF4y2Ba图5 cgydF4y2Ba)。氨基酸代谢途径进行了具体分析在第三通道级别,如图所示gydF4y2Ba图5 dgydF4y2Ba。丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸的新陈代谢,赖氨酸生物合成和降解,酪氨酸代谢,在L和CL和色氨酸代谢组调节与CK相比。gydF4y2Ba

图5gydF4y2Ba
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图5gydF4y2Ba。预计16 s rRNA基因的功能配置京都基因和基因组代谢途径的百科全书gydF4y2Ba(一)gydF4y2Ba和第二gydF4y2Ba(B)gydF4y2Ba代谢途径,碳水化合物的新陈代谢gydF4y2Ba(C)gydF4y2Ba和氨基酸代谢gydF4y2Ba(D)gydF4y2Ba在不同的组由Tax4Fun;CK,没有添加剂;C,纤维素酶;lgydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba);和CL,纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

一些代谢途径显著差异在第二个级别在第三个代谢途径进行了进一步的分析,如图所示gydF4y2Ba图6gydF4y2Ba。香叶醇的退化,柠檬烯、蒎烯,生物合成的含铁细胞组,non-ribosomal肽,non-ribosomal肽结构,ABC转运蛋白,双组分系统调节L和CL组与CK相比集团(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05),ansamycins和细菌分泌系统的生物合成的L和CL组表达下调与CK相比集团(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。gydF4y2Ba图7gydF4y2Ba说明了H的相对丰度gydF4y2Ba+gydF4y2Ba运输腺苷三磷酸酶显著增加L和CL组与CK和C组相比,1-phosphofructokinase的相对丰度,而果糖激酶和丙酮酸激酶显著降低(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。gydF4y2Ba

图6gydF4y2Ba
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图6gydF4y2Ba。一些京都百科全书的基因和基因组的影响与Tax4Fun代谢途径获得在不同群体多酮类化合物和萜类化合物的代谢gydF4y2Ba(安妮)gydF4y2Ba、膜运输gydF4y2Ba(F, G)gydF4y2Ba、信号转导gydF4y2Ba(H)gydF4y2Ba,复制和修复gydF4y2Ba(我)gydF4y2Ba。不同的字母相同的列显示显著差异(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。CK,没有添加剂;C,纤维素酶;lgydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba);和CL,纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

图7gydF4y2Ba
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图7gydF4y2Ba。丰度变化的关键酶gydF4y2Ba(安妮)gydF4y2Ba参与一些代谢途径gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料。不同的字母相同的列显示显著差异(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。CK,没有添加剂;C,纤维素酶;lgydF4y2BaLactiplantibacillus杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba);和CL,纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

天然气生产和gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba瘤胃发酵的gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料gydF4y2Ba

的gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba天然气生产的gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料保藏56天后所示gydF4y2Ba表5gydF4y2Ba。72 h后gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba瘤胃发酵,每组的天然气生产是稳定的。与CK组相比,gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba天然气生产L和CL组不同程度增加,但累计天然气产量最高的CL集团和CL组的天然气产量也显著高于其他组在第12 h和48 h (gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。天然气产量CL组与其他组相比显著增加(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。的理论最大值gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba从发酵发酵天然气生产gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料的预测模型是类似于实际的天然气生产。根据gydF4y2Ba表6gydF4y2Ba收益率的差异CHgydF4y2Ba4gydF4y2Ba和有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba不同治疗组间没有显著(gydF4y2BapgydF4y2Ba> 0.05),但CH的收益率gydF4y2Ba4gydF4y2Ba和有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在C组与其他组相比呈下降趋势。与CK组相比,北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n和MCP内容是L和CL组显著增加(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。gydF4y2Ba

表5gydF4y2Ba
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表5gydF4y2Ba。累计天然气生产的gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料发酵gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba72 h(毫升/ 220毫克DM)。gydF4y2Ba

表6gydF4y2Ba
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表6gydF4y2Ba。gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba发酵参数和瘤胃天然气生产gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料发酵gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba72 h。gydF4y2Ba

图8gydF4y2BaNDFD, DMD和ADFDgydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料后56天的保藏。72 h后gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba发酵、DMD CL组显著高于其他组(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。NDFD显著增加L和CL组与CK相比集团(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)。gydF4y2Ba

图8gydF4y2Ba
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图8gydF4y2Ba。的营养物质降解率gydF4y2Ba锦鸡儿几种gydF4y2Ba青贮饲料72 h后gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba瘤胃发酵。gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba

化学成分和发酵生产的gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料gydF4y2Ba

的营养成分gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba受到许多因素的影响,如植物栽培条件、气候条件、土壤肥力、增长时期,收获时期。此外,的营养成分gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba是一个重要的因素在决定青贮饲料的发酵品质,尤其是DM内容(gydF4y2Ba徐et al ., 2020gydF4y2Ba)。在这项研究中,我们发现每一组的DM内容减少在地窖里贮存的扩展。在保藏过程中,营养内容不断消耗,因为植物细胞和活跃的有氧微生物的呼吸作用,产生水,二氧化碳,和游离氨,从而降低DM的内容gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料(gydF4y2BaBorreani et al ., 2018gydF4y2Ba)。一般来说,青贮饲料的高NDF和ADF含量减少摄入和反刍动物的消化率(gydF4y2Ba格兰特和Ferraretto, 2018年gydF4y2Ba)。整个在地窖里贮存期间,NDF和ADF的内容gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料在C组略不同于那些在CK组。它不是很容易退化,因为gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba纤维素属于灌木,形成了一个结构紧凑与木质素和其他物质。gydF4y2Ba李et al。(2017)gydF4y2Ba表明添加纤维素酶和gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba可以显著减少NDF和ADF含量自来水笔青贮饲料,这与本研究的结果是一致的。WSC是主要的能源发展的实验室(gydF4y2Ba关et al ., 2018gydF4y2Ba)。在这项研究中,在未经处理的青贮饲料WSC含量是高于新鲜材料,报告的结果是一致的gydF4y2BaDuniere et al。(2013)gydF4y2Ba。在56天,CL WSC含量较高的价格相比其他群体因为gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba降解消化的植物细胞壁(纤维素、半纤维素和木质素)生产有机酸在地窖里贮存期间,和纤维素酶WSC含量增加了可耻的青贮饲料植物细胞壁(gydF4y2Ba邢et al ., 2009gydF4y2Ba;gydF4y2BaOgunade et al ., 2018gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

NHgydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n在青贮饲料主要是由植物蛋白酶和MCP的水解gydF4y2Ba梭状芽胞杆菌gydF4y2Ba和gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba,这表明在青贮饲料蛋白质的分解程度(gydF4y2Ba苏et al ., 2019gydF4y2Ba)。在这项研究中,北半球gydF4y2Ba3gydF4y2BaCK - n浓度高,C组,主要是与蛋白质的分解相关的原材料gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba(gydF4y2Ba梭状芽胞杆菌gydF4y2Ba在不被察觉的情况下)(gydF4y2Ba王y l . et al ., 2022gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba强夺者et al . (1995)gydF4y2Ba证明的实验室在青贮饲料阻止CP的降解。L CP含量和CL组高于其他两组,而北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n浓度较低,表明添加gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba抑制CP的降解gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。此外,快速降低pH值抑制蛋白质水解造成的各种植物酶和NH的速度下降gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n氧化亚硝酸盐和硝酸盐(gydF4y2Ba李et al ., 2020gydF4y2Ba)。在这项研究中,我们发现CL pH值和NH最低gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n和CP最高。这些结果表明,添加纤维素酶降低pH值和青贮饲料的LA含量增加,这与的结果是相一致的gydF4y2Ba陈et al。(2017)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba太阳et al。(2012)gydF4y2Ba,但不同的结果gydF4y2Ba刘et al。(2016)gydF4y2Ba,gydF4y2BaZhang et al。(2022 b)gydF4y2Ba。这种差异可以因为酶活性受到各种因素的影响,如酶的组成和来源,原料成分,额外的酶,酶的生存条件(gydF4y2Ba马丁内斯et al ., 2020gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

pH值和有机酸指标来确定青贮饲料的质量至关重要。在酸性环境中最有害细菌无法生存。一般来说,较低的pH值(< 4.2),青贮饲料的质量更好(gydF4y2Ba刘et al ., 2019gydF4y2Ba)。在这项研究中,pH值5.0高于CK在14天、56个主要是因为数量少的实验上gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba。尽管其他添加剂组的pH值显著降低与CK相比,他们仍在4.2以上。此外,这种现象与更高的粗蛋白质含量和酸碱缓冲能力gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba。的木质化程度gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba高,降解率gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba通过实验室和纤维素酶是缓慢,导致缓慢下降博士适当浓度的AA(30 - 40克/公斤DM)抑制有害病原微生物的生长,如酵母和霉菌,在青贮饲料(gydF4y2Ba龚et al ., 2018gydF4y2Ba),这导致青贮饲料的成功。在56天,CL和C组AA含量高于CK和L组,尤其是在CL组(17.75 g / kg DM),这可能是由于以下两个原因:添加纤维素酶可以水解半纤维素在青贮饲料免费的戊糖,可以转换成D-xylose-5-phosphate戊糖,然后发酵到洛杉矶和AA的混合物(gydF4y2Ba李et al ., 2018gydF4y2Ba;gydF4y2Ba李et al ., 2019gydF4y2Ba)。此外,DM时低,缓冲能量高,洛杉矶在青贮饲料可以转化为生产AA在厌氧条件下(gydF4y2BaPahlow et al ., 2003gydF4y2Ba)。因此,AA含量较高的C和CL组。洛杉矶是最理想的发酵产品,降低青贮饲料的pH值的主要因素。本研究表明,L是LA含量明显高于其他组,表明添加gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba可以促进多个基板生产拉和抑制AA;这些发现与是一致的gydF4y2Ba刘et al。(2016 b)gydF4y2Ba。此外,洛杉矶/ AA比率对实验室发酵的类型。洛杉矶/ AA > 3.0时,它是纯合子实验室发酵,而当LA / AA是< 3.0,这是杂合的(gydF4y2BaZhang et al ., 2010 bgydF4y2Ba)。洛杉矶/ AA L范围从8.30到7.59在整个保藏过程中,这是其他组的两倍以上。这表明,L是由纯合子实验室发酵。此外,实验室从纯合子的发酵类型在不同阶段的杂合的青贮饲料发酵。在这项研究中,我们表明,LA / AA是提高青贮饲料的CL在CL青贮饲料的早期阶段,但降低了青贮饲料的最后阶段。这可能是与之间的种内竞争有关gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba和纤维素酶在青贮饲料的后期阶段,导致从纯合子转向杂合的实验室发酵gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。gydF4y2Ba

通常,增加gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba单独或纤维素酶影响质量,但是最好的质量gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba观察青贮饲料纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba由于协同效应gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba和纤维素酶在青贮饲料发酵。gydF4y2Ba

微生物群落的gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料gydF4y2Ba

青贮饲料是一个社区接班过程涉及各种各样的微生物。因此,微生物群落的组成是至关重要的对于理解复杂的青贮饲料的发酵过程(gydF4y2BaLv et al ., 2020gydF4y2Ba)。在这项研究中,56天,CK香农指数高、辛普森指数低,表明高的微生物多样性。添加gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba和纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba微生物多样性的下降gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。它主要是因为迅速降低pH值L CL,克制的增长gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba,促进了增长gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba。当在青贮饲料占主导地位的细菌的丰度高,细菌群落的多样性较低。显示了类似的结果gydF4y2Ba江泽民et al。(2020)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba王et al。(2019)gydF4y2Ba在全植物玉米和桑叶青贮饲料。此外,主成分分析显示显著分离和区别细菌社区CK, L, CL,表明微生物群落的变化gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba和纤维素酶+gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba治疗在保藏过程中。青贮饲料质量的这种差异可以归因于微生物群落的变化。因此,基于α和β多样性分析,得出结论,纤维素酶和gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba的微生物多样性和群落结构的影响gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。gydF4y2Ba

在门级,不同青贮饲料之间的微生物群落结构差异较小,这主要是gydF4y2Ba厚壁菌门gydF4y2Ba和gydF4y2Ba变形菌门gydF4y2Ba。大多数的乳酸细菌属于gydF4y2Ba厚壁菌门gydF4y2Ba,分泌各种脂酶、多种纤维素酶和蛋白酶,参与生物大分子的降解(纤维素、淀粉和蛋白质),虽然gydF4y2Ba变形菌门gydF4y2Ba由几个有害的细菌,如gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba沙门氏菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba提要中的有机物分解,导致青贮饲料质量的退化(gydF4y2Ba元et al ., 2020gydF4y2Ba)。在这项研究中,相对丰富的gydF4y2Ba厚壁菌门gydF4y2Ba为75.20%,76.74%,98.39%,97.44%在CK, C、L CL,分别的相对丰度gydF4y2Ba变形菌门gydF4y2Ba24.69%,23.17%,1.50%,和2.40%,分别。gydF4y2BaZhang et al。(2022 c)gydF4y2Ba证明了gydF4y2Ba变形菌门gydF4y2Ba主要(54.50%),紧随其后的是gydF4y2Ba放线菌gydF4y2Ba(30.06%),gydF4y2Ba拟杆菌门gydF4y2Ba(9.57%)和gydF4y2Ba厚壁菌门gydF4y2Ba(3.26%)在治疗gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料。这些结果表明,高gydF4y2Ba厚壁菌门gydF4y2Ba丰富是有利于提高青贮饲料的质量。gydF4y2Ba

在属级、微生物群落结构不同青贮饲料之间的不同。玉米、高粱、大米为主gydF4y2BaWeissellagydF4y2Ba和gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba和紫花苜蓿主要是gydF4y2Ba明串珠菌属gydF4y2Ba(gydF4y2Ba彭日成et al ., 2011gydF4y2Ba)。gydF4y2BaZhang et al。(2022 c)gydF4y2Ba发现的原材料gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba包含gydF4y2Ba红球菌属gydF4y2Ba(13.73%),gydF4y2BaSphingomonasgydF4y2Ba(12.70%),gydF4y2BaPantoeagydF4y2Ba(7.09%),gydF4y2BaHymenobactergydF4y2Ba(7.06%),gydF4y2BaBurkholderia-Caballeronia-Paraburk-holderiagydF4y2Ba(2.37%)和大量的其他细菌(56.23%)。在目前的研究中,主要包括CK和C组gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba,gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba,gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba片球菌属gydF4y2Ba,gydF4y2BaWeissellagydF4y2Ba,而gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2BaL和CL组主要在丰富的98.10%和97.19%,分别。这表明细菌保藏后社会发生了重大的变化。gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba显著降低L和CL组与CK相比。这一结果表明,通过添加产生的酸性环境gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba和gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba+纤维素酶发酵gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料能有效地抑制的增长gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba,从而提高青贮饲料质量。gydF4y2Ba

LactiplantibacillusgydF4y2Ba在青贮饲料发酵中占据主导地位,推动生产有机酸、pH值降低,抑制有害细菌的繁殖。gydF4y2Ba程et al。(2022)gydF4y2Ba表明LA呈正相关,相对丰富的内容gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba。在目前的研究中,gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba稍微不同的L和CL组;然而,洛杉矶内容CL组明显低于L组。这表明,添加纤维素酶+gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba抑制生产。根据LEfSe分析,最主要的细菌gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba和gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2BaCK组。gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba青贮饲料中有害微生物,可与有益的细菌,包括实验室,为发酵底物,产生不良的发酵产品,如丁酸,琥珀酸和氨氮,防止实验室发展和破坏青贮饲料质量(gydF4y2Ba伯爵et al ., 2016gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Ba是一个parthenogenic厌氧乳酸细菌,可以独立于青贮饲料。gydF4y2BaCai (1999)gydF4y2Ba使用了5个菌株gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Ba菌剂,发现它对青贮饲料品质的影响较小。gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba和gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2BaCK组分别为23.87%和21.51%,分别,这可能是缓慢的pH值降低的原因和青贮饲料质量差。最主要的细菌gydF4y2Ba片球菌属gydF4y2Ba,gydF4y2BaWeissellagydF4y2Ba,gydF4y2BaMicrovirgagydF4y2Ba在C组。gydF4y2Ba片球菌属gydF4y2Ba和gydF4y2BaWeissellagydF4y2Ba异型发酵实验室。他们产生代谢WSC的洛杉矶和AA的混合物,它发挥了至关重要的作用在地窖里贮存的早期阶段;然而,它的活动限制在地窖里贮存的后期阶段(pH值减少gydF4y2Ba徐et al ., 2021gydF4y2Ba)。gydF4y2BaMicrovirgagydF4y2Ba属于gydF4y2Ba变形菌门gydF4y2Ba,主要生长在干旱或半干旱土壤,展品固氮(gydF4y2BaVeyisoglu et al ., 2016gydF4y2Ba)。然而,gydF4y2BaMicrovirgagydF4y2Ba很少发现在青贮饲料,它在青贮饲料中的作用需要进一步研究。此外,gydF4y2BaOchrobactrumgydF4y2Ba和gydF4y2BaSanguibactergydF4y2BaL和CL组很少报道在青贮饲料,和他们的角色需要进一步探索。gydF4y2Ba

KEGG代谢途径和关键酶的活动gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料gydF4y2Ba

KEGG是生物信息学资源对理解细胞和生物体的作用从基因组角度。在发酵过程中,细菌主要可发酵底物转变成不同的代谢物gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba不同的代谢途径。因此,我们评估gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba基于使用Tax4Fun KEGG分析青贮饲料代谢通路。56天后,大量的细胞过程和人类疾病CK和C组高于L和CL组,而丰富的环境信息处理和有机系统显著降低途径1级。结果表明,外源微生物通过添加gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba和gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba+纤维素酶gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料可以提高代谢水平的有益菌和发酵的质量gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料通过改变细胞特征和抑制膜运输和信号传输不受欢迎的细菌。下途径2级,gydF4y2Ba白et al。(2021)gydF4y2Ba表明,碳水化合物、氨基酸、核苷酸、辅因子、维生素和能量代谢密切相关的代谢途径在保藏期间。碳水化合物代谢主要包括glycoisomerization和糖酵解(gydF4y2BaKanehisa Goto, 2000gydF4y2Ba)。在目前的研究中,柠檬酸循环的相对丰度在CL组高于CK组,表明LA CL组低。随着柠檬酸循环需要有氧条件下,去除氢离子不能进入厌氧条件下完成氧化呼吸链(gydF4y2BaBanfalvi 1991gydF4y2Ba)。此外,大量的丙酮酸、乙醛酸和dicarboxylate新陈代谢CL组高于CK组。丙酮酸可以直接氧化成AA和有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在一定条件下,进一步解释原因的LA含量低于AA的CL组。氨基酸、植物中必不可少的物质,是至关重要的在促进初级代谢和植物蛋白质合成。56天的在地窖里贮存后,未发现重大的改变在每个治疗组氨基酸代谢途径级别2。途径3级下,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,生物合成赖氨酸、赖氨酸退化,酪氨酸和色氨酸代谢在L CL组比C和CK组显著增加,表明这些氨基酸代谢与NH相关联gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n形成gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料。因此,适当的抑制这些氨基酸代谢途径可能是一个潜在的措施减少NHgydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n浓度gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料。gydF4y2Ba

代谢途径与途径3级下显著差异进行了分析,进一步理解细菌社区的功能gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料。这些代谢途径主要包括萜类化合物和多酮类化合物的代谢,膜运输、信号转导、复制和修复。后56天的保藏,相对丰富的香叶醇,柠檬烯、蒎烯降解是L和CL组高于CK和C组,表明多酮类化合物和萜类化合物的代谢增加L和CL组。ABC转运蛋白的相对丰度增加,而细菌分泌系统的相对丰度降低了CL组比CK组。这表明,膜运输细菌发酵纤维素酶+社区gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba主要是gydF4y2Ba通过gydF4y2BaABC转运蛋白,ABC转运蛋白是更有效的比细菌分泌系统在青贮环境。此外,大量的错配修复DNA复制,核苷酸切除修复,和同源重组L和CL组略高于CK组,表明生化反应参与DNA复制和修复主要是反映的快速增长和增量gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba在L CL组。双组分体系的相对丰度低于CK和C组在L CL组,表明信号被抑制在CK和C组。gydF4y2Ba

关键酶发挥关键作用形成最终的青贮饲料的发酵产品。在实验室homofermentative发酵葡萄糖代谢gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba糖酵解途径(EMP)专门生产,而异型发酵实验室发酵gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba磷酸戊糖途径(PPP)生产AA,乙醇,有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba除了拉(gydF4y2Ba任et al ., 2011gydF4y2Ba)。1-phosphofructokinase、果糖激酶和丙酮酸激酶是主要的酶参与了EMP。1-phosphate脱氢酶的相对丰度,果糖激酶、丙酮酸激酶和CK组高于在CL组,表明在乳酸发酵酶CK组高于CL组,从而减少LA CL组的内容。6-phosphate葡萄糖脱氢酶主要参与PPP。在目前的研究中,相对丰富的6-phosphate和6-phosphoglucose脱氢酶在CL组高于CK组,表明CL组的异型发酵被提升。此外,巴基斯坦人民党是减少在CL组比CK组通路水平3。这种现象可以归因于复杂的多种酶参与了购买力平价,而6-phosphoglucose脱氢酶并不代表这个途径。相对丰富的HgydF4y2Ba+gydF4y2Ba运输腺苷三磷酸酶是L和CL组远高于CK和C组,和ABC转运蛋白的相对丰度更高的L和CL组,显示他们的强大的膜运输能力。gydF4y2Ba

天然气生产和gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba瘤胃发酵的gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料gydF4y2Ba

瘤胃pH值的重要指标之一,反映了瘤胃环境,及其正常范围是5.5 - -7.5 (gydF4y2BaCalsamiglia et al ., 2008gydF4y2Ba)。在目前的研究中,瘤胃发酵pH值(6.69 - -6.71)是在正常范围内,不影响微生物的正常生长和新陈代谢。一个更高的NHgydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n浓度增加蛋白质在瘤胃的降解速度或减少NH的利用率gydF4y2Ba3gydF4y2Ba瘤胃微生物- n。较低的NHgydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n浓度抑制纤维素降解和MCP合成(gydF4y2BaHristov et al ., 2002gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba坐在和Slyter。(1974)gydF4y2Ba证明了最合适的北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n浓度对瘤胃微生物增长20 - 50 mg / dLgydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba。NHgydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n含量在所有组在正常范围内,表明北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n浓度并不影响瘤胃微生物的生长。在瘤胃蛋白质和非蛋白氮是NH退化gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n,这可能是由微生物激活肽和氨基酸合成MCP (gydF4y2BaReynal et al ., 2007gydF4y2Ba)。因此,MCP可以反映增长率和微生物细胞的数量(gydF4y2Ba陈et al ., 2020gydF4y2Ba)。在目前的研究中,间接暗示添加纤维素酶和MCP增加内容gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba受益瘤胃微生物的生长在L CL组。gydF4y2Ba

在体外gydF4y2Ba天然气生产是一个重要的指标来评估饲料的发酵程度,可以反映的退化特征为反刍动物饲料(gydF4y2Ba陈et al ., 2016gydF4y2Ba)。天然气生产数量与饲料营养价值、瘤胃微生物活动,和饲料利用率。在目前的研究中,累计天然气总产量CL组显著增加在第一个48 h与CK组相比,可能是因为高质量的gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料在CL组,WSC积极内容,和NDF含量负相关,天然气产量(gydF4y2Ba李et al ., 2022 bgydF4y2Ba)。然而,没有观察到显著差异在天然气生产在72 h组中,这可能是由于不同的DM降解gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料瘤胃微生物添加剂的不同,对待类似的结果gydF4y2Ba熊et al。(2022)gydF4y2Ba。理论最大的天然气生产接近实际的天然气生产在每组;然而,理论最大的天然气生产之间的差异不同的治疗组不显著。然而,天然气产量在CL组显著高于其他组。CHgydF4y2Ba4gydF4y2Ba和有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在反刍动物瘤胃发酵过程中产生的温室气体。我们发现增加实验室全植物玉米和高粱青贮饲料瘤胃甲烷排放减少(gydF4y2BaKhota et al ., 2017gydF4y2Ba;gydF4y2Ba王问:et al ., 2022gydF4y2Ba)。然而,gydF4y2Ba埃利斯et al。(2016)gydF4y2BaCH发现无显著变化gydF4y2Ba4gydF4y2Ba水平当荷斯坦奶牛青贮饲料喂养处理实验室长时间运行和短时间,和目前的研究还显示相同的结果。gydF4y2Ba

青贮饲料消化率的关键指标之一,反映了青贮饲料质量(gydF4y2Ba郝et al ., 2021gydF4y2Ba)。gydF4y2BaDu et al。(2016)gydF4y2Ba研究了青贮饲料的化学成分之间的相关性和瘤胃营养物质的降解率,结果表明,模式和NDFD与CP含量呈正相关,与NDF和ADF含量负相关。在目前的研究中,DMD和NDFD CL组最高,明显不同于那些在CK组,这可能与高CP和CL组NDF含量较低,这与的结果是相一致的gydF4y2Ba刘et al。(2016)gydF4y2Ba。因此,在目前的研究中,纤维素酶+gydF4y2BalgydF4y2Ba。gydF4y2Ba杆菌的gydF4y2Ba除了积极的消化率的影响gydF4y2BaCgydF4y2Ba。gydF4y2Ba几种gydF4y2Ba青贮饲料。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

添加剂的加入降低了北半球gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n、DM、NDF和ADF含量在保藏期间。高LA含量青贮饲料纤维素酶处理和观察gydF4y2BalgydF4y2Ba。杆菌,但CL组AA含量就越高。的相对丰度gydF4y2BaLactiplantibacillusgydF4y2Ba显著增加,但这的gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Ba,gydF4y2BaWeissellagydF4y2Ba,gydF4y2Ba肠杆菌属gydF4y2Ba,gydF4y2Ba片球菌属gydF4y2Ba被显著降低在所有组除了C组较CK组。CL组AA含量高可以到相关的丰富的高- 6 -磷酸葡萄糖脱氢酶。大量的氢gydF4y2Ba+gydF4y2Ba运输atp酶和ABC转运蛋白是L和CL组高。L和CL组NH增加gydF4y2Ba3gydF4y2Ba- n和MCP含量和干物质降解率和中性洗涤剂纤维。gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba和纤维素酶提高了发酵参数、微生物群落组成和DM降解gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba的gydF4y2Bac .几种gydF4y2Ba青贮饲料的组合gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba和纤维素酶的最佳效果。gydF4y2Ba

数据可用性声明gydF4y2Ba

提出了原始的贡献研究公开。这些数据可以在这里找到:NCBI序列读取存档数据库下BioProject PRJNA909496。gydF4y2Ba

道德声明gydF4y2Ba

综述了动物研究和伦理委员会批准的内蒙古民族大学医学院。所有者的书面知情同意了他们的动物参与这项研究。gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

JJ, MW和BW设计实验。MX, RZ, YZ, MW进行了实验。CD和LD分析数据。JJ写的手稿。广州、MW和BW参与修订的手稿。所有作者阅读和批准了手稿。gydF4y2Ba

资金gydF4y2Ba

农业和农村事务部”综合示范工程关键技术牛羊饲养和繁殖的农业和畜牧业的过渡区”(16190050号,16200158号,16210096号);内蒙古科学技术支持项目(2022号yfxz0015);内蒙古自然科学基金(ms03072 2022号、2022号qn03027)。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Ba

本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。gydF4y2Ba

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