应用罗非鱼非细胞真皮基质诱导急性皮肤伤口修复的老鼠gydF4y2Ba

1介绍gydF4y2Ba

皮肤是人体最大的器官,和它的结构是复杂的。作为人类免疫的第一道防线,皮肤主要充当外部环境障碍(gydF4y2BaMorganti et al ., 2019gydF4y2Ba)。当皮肤受损,大量的病原体入侵,伤口容易感染,引起身体的免疫反应。因此,皮肤伤口修复的主要目标是恢复伤口的结构和功能的正常组织,加速伤口愈合(gydF4y2Ba林et al ., 2012gydF4y2Ba)。皮肤创伤,尤其是全层皮肤伤口愈合,由于缺少真皮,会导致表皮角化细胞的上皮形成自然困难。因此,全层皮肤缺损超过4厘米才能有效地修复皮肤移植gydF4y2BaArif et al ., 2020gydF4y2Ba)。虽然自体皮肤移植修复效果最好,它带来的风险感染,二次伤害和痛苦施主能级(gydF4y2BaGoverman et al ., 2017gydF4y2Ba)。皮肤生物材料的出现带来了曙光,促进伤口愈合。生物医学材料有良好的良好的生物相容性和低免疫原性等特点,它可以暂时取代现有的材料修复组织或器官,填补受损组织或器官,并诱导细胞渗透、扩散和功能。促进组织或器官修复和愈合(gydF4y2BaBanerjee et al ., 2014gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

胶原蛋白是细胞外基质(ECM)的主要组件。29种胶原蛋白被发现,其中I型胶原蛋白广泛存在于皮肤、肌腱、骨骼和其他组织(gydF4y2Ba阿拉姆和杰弗瑞,2019年gydF4y2Ba;gydF4y2BaLim et al ., 2019gydF4y2Ba)。它可以指导定向生长的成纤维细胞和其他细胞(gydF4y2BaSapru et al ., 2021gydF4y2Ba)。由于其良好的生物学特性,如良好的生物相容性,生物降解能力和较低的免疫原性,它被选为材料的一个重要来源,可以广泛应用于生物医学组织工程。近年来,生物医学材料准备从不同的胶原蛋白提取来自陆地和海洋等动物被广泛使用,特别是从陆地哺乳动物如人类、猪和牛。然而,由于人畜共患疾病的风险,如口蹄疫,疯牛病和伊斯兰教等宗教约束,以及生产成本高,很难满足实际的需求。因此,新的海洋胶原蛋白来源的材料,如鱼,有广泛的来源,更好的安全性和较低的成本,已经成为选择之一(gydF4y2BaZhang et al ., 2016gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

非细胞真皮基质(ADM)通常是基于碱性溶液提取胶原蛋白的非细胞的前提下删除动物皮肤组织的细胞结构,其余相对较弱的免疫原性的ECM和真皮胶原纤维网状细胞支架结构(gydF4y2Ba损失et al ., 2000gydF4y2Ba;gydF4y2BaFitton et al ., 2001gydF4y2Ba;gydF4y2BaCrapo et al ., 2011gydF4y2Ba)。ECM提供和维护组织结构,引导和调节细胞生长和迁移,具体的过程中起着关键作用的皮肤修复(gydF4y2BaNystrom Bruckner-Tuderman, 2019gydF4y2Ba)。各种相关产品已经广泛应用于生物医学领域如急性皮肤创伤如车祸或烧伤,诱导骨再生,乳房修复和硬脑膜修复,收到了良好的反馈(gydF4y2BaFosnot et al ., 2011gydF4y2Ba;gydF4y2BaMagnusson et al ., 2017gydF4y2Ba;gydF4y2Ba王L.-P。et al ., 2021)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

此外,鱼类胶原蛋白也被广泛研究。石等人相比,非细胞的影响鱼的皮肤和非细胞牛皮烧伤修复,它证明了非细胞鱼皮比非细胞牛皮(gydF4y2Ba石头et al ., 2021gydF4y2Ba);陈等人从罗非鱼中提取胶原蛋白,它可以迅速和有效地促进大鼠全层伤口愈合(gydF4y2Ba陈et al ., 2019gydF4y2Ba);胡等人从罗非鱼皮中提取海洋胶原蛋白肽能促进伤口愈合,如深Ⅱ度烫伤(gydF4y2Ba胡锦涛等人。,2017年gydF4y2Ba);周等人使用电纺技术制备罗非鱼皮肤胶原蛋白纳米纤维,可引起皮肤伤口愈合。各种研究表明,collagen-rich鱼皮材料有很高的生物降解性,所以我们认为获得TADM领域有很好的应用前景的急性创伤修复和再生医学。gydF4y2Ba

在这项研究中,罗非鱼非细胞真皮基质(TADM)准备从罗非鱼皮,及其理化性质进行了测试。与此同时,生物降解性和生物相容性测试gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba移植和细胞共培养,与同类产品相比的胎牛皮肤非细胞真皮基质(FBADM)市场。此外,根据其特点,急性皮肤伤口修复在SD大鼠进行实验来验证TADM的生物学性质。gydF4y2Ba

2材料和方法gydF4y2Ba

2.1材料gydF4y2Ba

罗非鱼皮从海南Qinfu购买食品有限公司,有限公司(海南、中国)。胎牛皮肤非细胞真皮基质(FBADM)从烟台Zhenghai购买生物技术有限公司有限公司(烟台,中国)。女性雄性SD (SD)大鼠中(200 - 220克)是从济南Pengyue购买实验动物养殖有限公司有限公司(济南,中国)。新西兰白兔(2 - 2.5公斤)是购自青岛康达生物科技有限公司有限公司(青岛)。所有其他的化学试剂均为分析纯,使用前未经纯化。所有动物生产商进行一般按照指南的动物保健和使用委员会制度。gydF4y2Ba

2.2制备罗非鱼非细胞真皮基质(TADM)gydF4y2Ba

对罗非鱼皮浸在3%碳酸氢钠(NaHCOgydF4y2Ba_3gydF4y2Ba)解决方案12 h material-to-liquid 1:10的比例(w / v)。鱼的皮肤浸泡在0.1 M氢氧化钠(氢氧化钠)解决方案8 h和material-to-liquid是1:10的比例(w / v)。用0.01磷酸盐缓冲剂(PBS) 3次去除脂肪和其他杂质。然后鱼皮肤浸泡在纯水和1 m氯化钠(氯化钠)解决方案12 h,和material-to-liquid是1:5的比例(w / v)。鱼皮是0.1 M氢氧化钠溶液中浸泡6 h, material-to-liquid是1:10的比例(w / v)和浸泡6 h。洗鱼皮PBS为3 * 0.01米decellularize鱼的皮肤。然后鱼皮肤浸泡在3%过氧化氢(HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba)解决方案6 h, material-to-liquid是1:5的比例(w / v),和鱼的皮肤漂白。用0.01米无菌PBS为3次。最后,清洁TADM(湿),纯净水,切5厘米×5厘米大小的,冷冻干燥冷冻干燥机,并消毒gydF4y2Ba^60gydF4y2Ba有限公司(gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

2.3 TADM的物理和化学性质gydF4y2Ba

2.3.1 Hematoxylin-Eosin染色gydF4y2Ba

罗非鱼皮和TADM与4% (w / v)多聚甲醛固定,脱水和嵌入在石蜡。5μm片被削减,沾hematoxylin-eosin(圆))染色方法和普通光学显微镜下观察(DM1000领导、徕卡、德国)。gydF4y2Ba

2.3.2溶血试验gydF4y2Ba

TADM和无菌生理盐水(10毫米×60 mm: 1毫升)提取在37°C h。72年收集的血液来自新西兰白兔的耳中动脉。2% (w / w)草酸钾的解决方案是用作抗凝剂,和抗凝剂(1毫升兔血:50μL 2%草酸钾)是与生理盐水混合4:5的比率。三管5毫升TADM提取准备为实验组。同时,相同数量的去离子水作为阳性对照组和等量的生理盐水阴性对照组。每组的离心管在在37°C水浴预热30分钟100年μL稀释血液抗凝兔子被添加到每个管,混合均匀,孕育了60分钟37°C。孵化后,管在2100转离心5分钟的速度高速离心机(Sorvall圣8 r,热,美国)。离心后,观察溶血,上层清液的吸光度的观察每组可见分光光度计(UV2450,一争高下,日本)545海里,这是与生理盐水调整为零。溶血率是根据以下公式计算。gydF4y2Ba

在公式中,gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba的平均吸光度TADM集团吗gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba生理盐水组的平均吸光度,gydF4y2Ba_3gydF4y2Ba去离子水的平均吸光度组。gydF4y2Ba

2.3.3扫描电子显微镜gydF4y2Ba

TADM的结构和FBADM被扫描电子显微镜(SEM)观察。TADM被切成小块的1毫米×1毫米和固定在导电胶的样表。表面喷金后,显微组织观察TADM或FBADM Smur4800冷了场发射扫描电镜(s - 4800、日立、日本)。gydF4y2Ba

2.3.4孔隙度的确定gydF4y2Ba

TADM切成10毫米gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba大小的组织和把它放在10毫升比重瓶满是无水乙醇,和体重的重量比重瓶之前和之后投入非细胞组织。测量的总孔隙度(P) TADM按照下列公式:gydF4y2Ba

在W的公式gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba是指比重瓶的重量之前放入组织,和WgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba的重量比重瓶后放入组织。gydF4y2Ba

2.3.5溶胀比的确定gydF4y2Ba

溶胀比是一个重要的指数评估伤口敷料的亲水性药物,因为高膨胀率有利于细胞粘附和渗透增长(gydF4y2BaAmirian et al ., 2021gydF4y2Ba;gydF4y2Ba谭et al ., 2021gydF4y2Ba;gydF4y2Ba王s . et al ., 2021gydF4y2Ba)。首先,称干重(D)的三个样本(100毫克)TADM FBADM支架,用纯净水浸泡,去除地表水与滤纸的脚手架,权衡脚手架湿重(W),并计算非细胞的肿胀率支架用以下公式:gydF4y2Ba

的公式,W是湿重和D是干重。gydF4y2Ba

2.3.6傅里叶变换红外光谱学的决心gydF4y2Ba

TADM和FBADM减少到1毫米×1毫米的大小,粉碎和用于红外光谱。胶原蛋白的红外光谱在脚手架由傅里叶变换红外光谱学(热费希尔Nicolet 6700年,美国)。扫描范围是400 - 4000厘米gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}。分析的数据来源2021 (MicroCal,美国)软件。胶原蛋白的吸收峰是酰胺,酰胺B,酰胺,二酰胺和三酰胺。gydF4y2Ba

2.3.7的机械强度gydF4y2Ba

为了评估支架的机械强度,TADM和FBADM 0.6毫米厚度(以螺旋测微计)切成3.5厘米的长条×0.2厘米在室温下,抗拉强度是由万能材料试验机测试(CMT8502、MTS系统、中国)。把样品放在夹具、最大负载是500 cN,灵敏度0.01 cN,测试速度5毫米/分钟。所有测试的重复数是5,和平均值。gydF4y2Ba

2.3.8测定羟脯氨酸含量gydF4y2Ba

羟脯氨酸(忧郁)是胶原蛋白的主要组成部分,它的内容可以是胶原蛋白的内容。三个样品的0.2 g冷冻罗非鱼皮肤和冻干非细胞提取罗非鱼皮6 M盐酸在110°C。罗非鱼皮之前和之后的忧郁内容去细胞是由羟脯氨酸测定工具包(Solarbio,中国)。gydF4y2Ba

2.4在体内降解gydF4y2Ba

2.4.1植入大鼠gydF4y2Ba

15 SPF-grade 8周雌性SD大鼠被选中。麻醉后,0.5厘米的全层皮肤开口开在脊柱的两侧,1.5厘米和0.5厘米×0.5 cm-sized FBADM和TADM放置在左右,分别和缝合。gydF4y2Ba

2.4.2 Hematoxylin-Eosin染色gydF4y2Ba

模型的建立之后,三只老鼠从第三天,7、14、21日和28天后的建立模型,和皮下植入支架组织被固定在4%多聚甲醛溶液。24 h后固定,常规石蜡组织是嵌入在石蜡和分组因为他染色。gydF4y2Ba

苏木精和伊红染色后,TADM的形态学和细胞浸润和FBADM光学显微镜下观察。他走时染色可以识别组织细胞结构和其内部的DNA和蛋白质的位置。DNA是染成蓝色或紫色和蛋白质是染成红色或粉红色。gydF4y2Ba

2.5细胞培养gydF4y2Ba

为了评估细胞毒性,增殖率和TADM附着力,我们选择小鼠成纤维细胞(L929)与TADM FBADM培养细胞。gydF4y2Ba

2.5.1细胞毒性和增殖率gydF4y2Ba

在无菌条件下,TADM和FBADM切成30毫米×90毫米大小和放置在9毫升杜尔贝科修改鹰高葡萄糖(DMEM-H)完成中、在37°C提取24小时获得细胞培养基(gydF4y2Ba马et al ., 2020gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

Calcein-AM / PI双染色的细胞毒性检测和CCK-8方法。当细胞生长对数期,细胞被细胞计数器计数(TC20 BioRad,美国)。根据1×10的标准gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba每口井的细胞,500μL细胞悬液放入48-well板。有三个平行组在对照组和三个平行组实验组。细胞粘附在墙上后,最初的细胞培养基是提取所取代。孵化后15分钟在37°C,这些细胞被沾Calcein-AM / PI双染色根据指令的工具包(Solarbio,中国),和细胞孵化37°C。荧光倒置荧光显微镜下被490 nm波长兴奋(呼应rvl - 100 g,美国),并观察活死人细胞的分布。根据5×10的标准gydF4y2Ba^3gydF4y2Ba/好吧,200年的混合物μL细胞悬液和提取是按顺序添加到96孔板根据20的比例,40岁,60岁,80和100%。与细胞共培养后24 h,每个装备有100μL CCK-8解决方案(10μL CCK-8 90年μL介质)根据CCK-8工具包的指令。然后培养板在37°C和5%孵化有限公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba2 h, opticaldensity (OD)值被标仪检测到470海里(BioTek时代,美国)。gydF4y2Ba

2.5.2观察细胞粘附gydF4y2Ba

L929细胞在DMEM培养高葡萄糖完成中含10%胎牛血清(Gibco、美国)和1%青霉素和链霉素(Solarbio,中国)。L929细胞培养细胞中孵化器在37°C和5%的公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba。这些细胞被消化和细胞生长对数期时计算。200年之后μL细胞悬液是插入到96孔板(2毫米×2毫米大小)。TADM和FBADM放入细胞悬液,细胞培养24小时,24小时固定用2.5%戊二醛溶液,冻干。细胞的渗透和发展被扫描电子显微镜观察。gydF4y2Ba

2.6大鼠皮肤创伤模型gydF4y2Ba

2.6.1皮肤创伤模型的建立gydF4y2Ba

十八SPF-grade 8-week-old雌性老鼠(200 - 220 g),无菌操作期间维护操作。10%水合氯醛注入腹腔内根据0.4毫升/公斤体重比率。两个全层伤口直径1厘米了两岸的SD大鼠的脊柱。伤口的一边贴在伤口TADM或FBADM以避免感染。伤口被用来作为对照组,对照组不做任何处理(只有医疗纱布)。正常喂养后操作。后检查伤口的形状在第三,第七和术后第14天,每组三只老鼠被安乐死,和伤口组织被固定在4%多聚甲醛24 h,嵌入在石蜡,随机切成5μm厚部分。gydF4y2Ba

2.6.2组织病理学检查gydF4y2Ba

皮肤的组织部分第三,7日,第14天沾hematoxylin-eosin())和马森。光学显微镜下的组织病理学检查。伤口愈合的变化、纤维母细胞内容、血管再生、炎症细胞和胶原蛋白沉积被观察到。分析了胶原蛋白的体积分数ImageJ(美国国立卫生研究院)软件和起源2021。gydF4y2Ba

2.6.3免疫组织化学gydF4y2Ba

皮肤组织样本后第14天脱蜡、水化,孕育了30分钟3% HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba在37°C。片与PBS洗3次,每次5分钟。这些片放入10毫米柠檬酸缓冲(pH = 6.0),煮5分钟加热,然后在室温下冷却修复抗原。这是洗5分钟与PBS 3次。5%山羊血清用于密封的非特异性结合位点在37°C后10分钟。删除多余的液体,非特异性结合位点是孵化抗表皮生长因子(EGF)抗体,anti-fibroblast生长因子(FGF1)抗体,anti-nerve生长因子(神经生长因子)抗体和抗血小板内皮细胞粘附molecule-1 (CD31)抗体在37°C 2 h。这是与PBS洗5分钟3次。然后用生物素化的30分钟是孵化合辣根山羊anti-rabbit二级抗体在37°C。这是洗5分钟与PBS 3次。片沾少量的解决方案,与自来水和re-stained苏木精冲洗,然后切片梯度脱水,密封,普通光学显微镜下观察染色。gydF4y2Ba

2.7统计分析gydF4y2Ba

SPSS25.0软件是用于统计分析。所有结果的数据表示为平均值±标准偏差(平均数±标准差)。双尾gydF4y2BatgydF4y2Ba以及或单向方差分析(方差分析)是用于统计显著性。这种差别十分明显(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05),差异非常显著(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.01)。gydF4y2Ba

3所示。结果和讨论gydF4y2Ba

3.1 TADM本身的理化特性gydF4y2Ba

皮肤伤口修复是一个动态过程,包括炎症、增生、血管化和再生。修复过程不仅需要大量的成纤维细胞增殖,而且血管和神经的形成同样重要。大面积全层皮肤修复,由于缺少血管化的新皮肤,影响修复的影响,导致伤口愈合缓慢,明显的伤口收缩和明显的疤痕组织的形成(gydF4y2Ba林et al ., 2021gydF4y2Ba)。适当的ECM结构可以提供结构对成纤维细胞的生长和迁移的支持,并结合促进相关因素的表达,促进伤口愈合(gydF4y2Ba雪et al ., 2021gydF4y2Ba)。再生医学作为伤口敷料的组织工程支架,它必须有良好的孔隙度的特点,机械强度、生物相容性、生物降解性、低免疫原性。冷冻干燥技术是一个重要的技术制造可控多孔结构材料在再生医学中的应用。孔隙空间结构和组织细胞微环境兼容性伤口修复材料是非常重要的,因为它们有利于细胞渗透,增长和扩散,和其他营养素的免费交通。生物材料的膨胀能力起着重要的作用在止血、伤口愈合的级联控制药物释放的能力退化,在伤口处血液浸和保水性。冷冻罗非鱼非细胞真皮基质(TADM)是一种天然ECM结构能够吸收和吸收大量的水或生物液体。计算后,TADM支持的孔隙度可以达到82.51%,膨胀率高达1549%,亲水性和保水性很好。它有利于细胞浸润和增长。机械强度是另一个重要指标评价支架的力学性能,因为更高的机械强度有利于维护支架结构的完整性。gydF4y2Ba

图1一个gydF4y2Ba表明冻干TADM多孔海绵。冷冻罗非鱼皮肤的细胞结构不能被染色后(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba(左)。通过非细胞治疗,细胞TADM完全移除和胶原纤维的结构完整性并未损坏(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba,对吧)。新西兰白兔溶血试验的结果表明,TADM材料没有溶血性属性(gydF4y2Ba图1 cgydF4y2Ba)。所示gydF4y2Ba图1 dgydF4y2Ba扫描电子显微镜的结果表明,TADM和FBADM高孔隙度和结构是不同的。TADM可分为致密层(外表面)和松层(内层),和孔隙结构主要是薄膜的层状结构。另一方面,FBADM的前部和侧显示孔隙结构。表面致密结构更有利于阻止伤口和外部环境之间的联系。gydF4y2Ba

图1 egydF4y2Ba显示非细胞真皮的红外光谱矩阵罗非鱼的皮肤,和I型胶原蛋白的典型峰:酰胺,酰胺B,氨基酰胺Ⅰ、Ⅱ和酰胺Ⅲ可以看到。在红外波段Ⅰ型胶原蛋白,酰胺吸收峰出现在3400 - 3440 cm - 1的范围,和峰值变化到一个较低的频率- n H组胶原蛋白肽参与氢键的形成;酰胺Ⅰ的特征吸收频率乐队在1600年和1700 cm - 1;酰胺Ⅱ乐队的正常吸收范围是1500到1600 cm - 1;酰胺Ⅲ峰的吸收范围是1200到1360 cm - 1 (gydF4y2Ba李et al ., 2013gydF4y2Ba)。因此,红外光谱结果表明,TADM的主要成分是I型胶原蛋白,胶原纤维三螺旋结构完成,非常适合作为再生医学材料使用。gydF4y2Ba图1 fgydF4y2Ba显示的平均最大拉力TADM FBADM 21.76和21.09 MPa,分别和平均断裂伸长率37.47%和39.89,分别表明TADM具有良好的机械强度,是非常适合生物医学材料。gydF4y2Ba图1 ggydF4y2Ba表明,罗非鱼的皮肤羟脯氨酸含量平均非细胞治疗前后分别为7.62和10.12%,以及它们之间几乎没有区别,这表明非细胞治疗对TADM胶原蛋白含量的影响不大。gydF4y2Ba

3.2 TADM生物相容性评价gydF4y2Ba

为了证实罗非鱼非细胞真皮基质(TADM)的生物相容性材料,我们验证了他们gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba和gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。细胞毒性的材料会影响细胞的新陈代谢。钙黄绿素后AM-PI染色,活细胞和死细胞都是绿色的红色(gydF4y2BaZhang et al ., 2021gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba显示,对照组和TADM集团都有明显的扩散趋势在3和5天。中的实验结果表明,该细胞TADM组与对照组相比,长得好,有坏死细胞的比例无显著差异,表明TADM脚手架没有细胞毒性。同样,CCK-8测试的结果(gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba)也证明了细胞增殖速率和没有区别TADM组和对照组之间的细胞毒性,生物相容性的TADM是令人满意的。gydF4y2Ba

图2 cgydF4y2Ba表明L929细胞通常可以渗透TADM并遵守它。像FBADM TADM具有良好的纤维母细胞粘附和诱导成纤维细胞迁移和增长潜力。细胞学细胞粘附的结果还表明,TADM不仅具有较高的孔隙度,而且还能促进细胞粘附和对细胞生长很友好。gydF4y2Ba

通过皮下植入老鼠,发现TADM组织液渗透和粘附到周围组织第三天,并逐渐退化,形成一个组织质量第七/第14天。21天,矩阵是退化的一部分,28天,TADM完全退化和样本不能获得。这基本上是一样的降解率FBADM样本gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。的结果gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba降解对老鼠的实验显示,没有过敏等不良反应在所有在植入老鼠。gydF4y2Ba

皮下植入鱼皮非细胞真皮的组织学染色矩阵所示gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba。结果表明,TADM和FBADM大量组织液渗透第三天,一些炎性细胞进入沿着大孔支架,支架的结构是完整的,纤维涂层开始形成。第七天,少量炎症细胞在支架的支架渗透到毛孔小,和胶原纤维支架开始降低,这意味着已经开始退化,脚手架已经坚持皮肤结缔组织。第14天,脚手架已经完全渗透,巨噬细胞等炎性细胞,形成大量多核巨噬细胞吞噬支架,和胶原纤维结构不完整,这基本上是结合皮肤和细胞正常的软组织。21天,支架的结构不能区分,和大多数的炎症细胞浆细胞,形成慢性炎症,身体适应。随着植入时间的延长,越来越多的炎症细胞浸到脚手架,脚手架的吞噬和降解。gydF4y2Ba

3.3在老鼠身上皮肤伤口修复gydF4y2Ba

的安全性和有效性得到罗非鱼非细胞真皮基质(TADM)被全层皮肤伤口愈合评价大鼠2周,并与消极和积极控制商业脚手架(FBADM)。gydF4y2Ba

图3 b, CgydF4y2Ba每组表明,伤口严重萎缩前3天,和减少的程度是相似的,但对照组有明显的凹疤,而牛皮纹理是困难的,这使得血液痂形成一个大的褶皱,并不漂亮,容易断裂,造成二次伤害。第七天,伤口TADM组显著低于FBADM组和对照组,和没有显著差异愈合FBADM组和对照组之间的区域。第14天,伤口TADM组和FBADM组基本痊愈,而对照组仍未完全愈合,形成了一个大伤疤。红肿的程度TADM组和FBADM组明显比对照组比较,也没有明显的感染或免疫排斥在整个修复过程中,这表明TADM有很好的隔离能力和抗菌感染伤口和外部环境的能力,和良好的生物相容性。gydF4y2Ba

Histomorphological分析再生皮肤组织的愈合阶段被用来评估治疗TADM对伤口愈合的影响。上皮形成成功的伤口关闭是一个决定性的参数。在缺乏上皮形成的情况下,不能认为治愈伤口。他走时染色(gydF4y2Ba图3 dgydF4y2Ba)表明,在初始阶段的维修,炎症发生在对照组,TADM FBADM团体,反对外部入侵的病原微生物和同种异体移植物排斥反应,这属于正常的身体免疫现象。7天之后,大量的新成立的真皮和肉芽组织形成伤口附近FBADM和TADM组,证明修复速度加快到第14天。伤口在FBADM TADM组基本上是由新成立的真皮修复,只有少量的肉芽组织存在,在仍有更多的肉芽组织对照组。结果表明,成熟的血细胞,毛囊、表皮增厚和成纤维细胞可以看到TADM组14天。TADM有很好的生物活性。他染色显示大量的疤痕的伤口修复网站对照组,而FBADM组和TADM组开始毛囊再生,开始形成正常真皮结缔组织。胶原蛋白沉积可以用来评估伤口愈合的影响。gydF4y2Ba图3 e, FgydF4y2Ba表明,第三,第七和伤口修复的第14天,胶原蛋白的体积分数TADM组明显高于对照组。gydF4y2Ba

免疫组织化学结果所示gydF4y2Ba图3 ggydF4y2Ba,这表明TADM组和FBADM组显著提升又有些皮肤保护方面的新愈合的表达生长因子EGF、FGF,神经生长因子和CD31。EGF能促进角质细胞的增殖和迁移,加快上皮形成(gydF4y2Ba邵et al ., 2021gydF4y2Ba)。I型胶原基因可以限制瘢痕成纤维细胞的胶原蛋白沉积。FGF能促进迁移,增殖和成纤维细胞形成血管,抑制I型胶原基因的表达和防止疤痕形成(gydF4y2Ba谢et al ., 2008gydF4y2Ba;gydF4y2Ba施et al ., 2013gydF4y2Ba)。神经生长因子能促进神经细胞的生长和分化,促进神经修复。EGF、FGF发挥重要作用在伤口愈合(gydF4y2Ba陈et al ., 2019gydF4y2Ba)。CD31血小板内皮细胞粘附molecule-1,代表血管的增殖。血小板内皮细胞粘附的相对数量和分布molecule-1在伤口愈合的过程中对伤口愈合具有重要意义。第14天,表达EGF、FGF和神经生长因子在TADM组和FBADM组高于对照组。结果表明,TADM柔和的质地比类似FBADM在市场上出售,TADM提升皮肤的表达,血管和神经修复因素如EGF、FGF,神经生长因子和CD31。TADM可以诱导和促进入侵,增长和扩散的皮肤成纤维细胞,显著促进伤口收缩和愈合,促进皮肤结构重建,防止伤口感染,促进血管生成和胶原蛋白沉积,在全层皮肤伤口有更好的治疗效果。因为TADM具有良好组织空间结构、生物活性和机械性能,非常适合皮肤和其他软组织创伤。这些结果表明,TADM皮肤修复敷料是一种很有前途的完整的层级。gydF4y2Ba

4结论gydF4y2Ba

在这项研究中,我们准备了一个非细胞真皮基质支架来自罗非鱼皮肤和其属性特征。结果表明,我们的TADM主要由I型胶原蛋白,和具有良好的生物支架结构,机械强度,生物降解性和生物相容性,这有利于细胞渗透,附着力和增长。其良好的生物活性已被证实大鼠皮肤创伤修复模型,可诱导生物因素的表达与皮肤修复,同时发挥很好的作用,促进皮肤伤口愈合。这是一个很好的生物医学组织工程支架材料,具有良好的应用前景。gydF4y2Ba

数据可用性声明gydF4y2Ba

最初的贡献提出了研究中都包含在本文/辅料,可以针对相应的作者进一步询问。gydF4y2Ba

道德声明gydF4y2Ba

动物研究是审查和批准的动物保健和使用委员会ofYantai蓝迪生物技术有限公司有限公司gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

KL:概念、方法验证、形式分析,可视化,软件。原创作品。LW:写作-审查和编辑、监督、数据管理。XH:验证、形式分析、可视化。王:调查、监督。韩:验证、形式分析平方:写作:审查和编辑。gydF4y2Ba

资金gydF4y2Ba

这项工作由科技部支持山东省(2019号jzzy011103)。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Ba

本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。gydF4y2Ba

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