薯蓣皂苷配基增强liposome-enabled核酸递送和调制CRISPR / Cas9-mediated基因编辑的内吞作用的途径gydF4y2Ba

介绍gydF4y2Ba

CRISPR / Cas9-based基因组编辑平台的应用迅速增长的基础和临床研究。CRISPR / Cas9系统,Cas9蛋白质形成双链断裂(双边带)和单链RNA (sgRNA)帮助执行基因的核酸酶与精度编辑(gydF4y2Ba萨赫勒et al ., 2019gydF4y2Ba)。可以探索引入双边带或删除所需的基本序列,持有有前途的潜在的基本和转化研究(gydF4y2BaLeonova Gainetdinov, 2020gydF4y2Ba)。Cas9核酸酶可以在质粒DNA或mRNA表达细胞内的核酸酶的形式,或者在一个本地蛋白质形式核糖核蛋白(RNP)基因编辑(gydF4y2Ba段et al ., 2021gydF4y2Ba)。三种不同形式的Cas9交付他们的优势和挑战。在这些三个选项中,交付Cas9 pDNA形式主要是探索基础研究由于其易于应用程序(gydF4y2BaPattni et al ., 2015gydF4y2Ba;gydF4y2BaFajrial et al ., 2020gydF4y2Ba)。各种可能的交付方法已经被开发出来gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba基因编辑(gydF4y2Ba垫片et al ., 2017gydF4y2Ba)。然而,他们的应用程序仍然有限,由于挑战扩大编辑(细胞和过高的成本gydF4y2Ba利诺et al ., 2018gydF4y2Ba)。在病毒载体、adenoviral腺相关病毒(AAV),和慢病毒载体被广泛用于交付Cas9系统编码磁带目标细胞(gydF4y2Ba徐et al ., 2019gydF4y2Ba;gydF4y2BaBulcha et al ., 2021gydF4y2Ba)。虽然病毒携带者高效,可能引起致癌作用和免疫原性的重大关切他们的治疗应用程序(gydF4y2Ba荷迪et al ., 2017gydF4y2Ba;gydF4y2Ba徐et al ., 2019gydF4y2Ba)。DNA包装容量有限的交付是一个主要的障碍大规模基因组编辑系统,如取得和CRISPR / Cas9 (gydF4y2Ba利诺et al ., 2018gydF4y2Ba)。clinical-grade,更重要的是,大规模的向量生产是病毒的主要技术障碍的应用交付(gydF4y2BaBulcha et al ., 2021gydF4y2Ba)。病毒性交付系统,特别是lipid-based系统被认为是有前途的替代制造业和缓解由于其鲁棒性在他们的应用程序(gydF4y2BaRajesh et al ., 2007gydF4y2Ba;gydF4y2BaKulkarni et al ., 2018gydF4y2Ba;gydF4y2Ba魏et al ., 2020gydF4y2Ba)。病毒性系统提供优势病毒载体与低免疫原性,没有插入突变,这可能减少短期和长期的副作用的机会(gydF4y2Ba检查,2003gydF4y2Ba;gydF4y2Ba草丛et al ., 2004gydF4y2Ba;gydF4y2Ba凯,2011gydF4y2Ba;gydF4y2Ba阴et al ., 2014gydF4y2Ba)。同时,提供更大的遗传能力有效载荷使阳离子脂质一个有吸引力的替代CRISPR / Cas9交付系统(gydF4y2Ba王et al ., 2020gydF4y2Ba)。更重要的是,最近的进步在过去的几年里探索信使rna技术gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba基因编辑为小说类基因编辑疗法铺平了道路。Gillmore等人成功编辑转体基因(竞技场队伍)基因在成人肝治疗人类遗传转体基因(hATTR)淀粉样变,静脉注射脂质纳米颗粒封装Cas9 mRNA和基因打靶单一竞技场队伍指导RNA (sgRNA) (gydF4y2Ba巴蒂斯塔Flotte, 2021gydF4y2Ba;gydF4y2BaGillmore et al ., 2021gydF4y2Ba)。成功的启发,脂质nanoparticle-mediated SARS-CoV2和信使核糖核酸疫苗gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba基因编辑,几次已经开发一种适合多个治疗应用程序的交付向量。gydF4y2Ba

在我们先前的努力开发高效的核酸交付脂系统,我们评估脂质分子结构的影响,包括亲水头部组、疏水性变化,和链接器功能(gydF4y2BaMukthavaram et al ., 2009gydF4y2Ba)。从结构活性调查,脂质体的酰胺linker-based阳离子脂质被发现有效地提供各种核酸,包括pDNA、成分和微核。然而,这些发现脂质体的转染效率低,大质粒(大于10 kb)如CRISPR / Cas9质粒。这是一个大家所熟知的现象,质粒的转染效率也取决于它的大小。小质粒可以很容易地交付,而交付更大的质粒是一个挑战(gydF4y2BaMahalingam et al ., 2022 bgydF4y2Ba)。提高阳离子脂质转染效率,我们开始探索其他成分的脂质纳米粒子系统作为替代胆固醇。在我们发现之前,我们证明了使用甾类spirosolane和番茄碱代替胆固醇脂质体配方会提高核酸转染permeabilizing膜(gydF4y2BaRangasami et al ., 2019gydF4y2Ba)。玛丽C.J. et al。证明了皂角苷配基可以用来permeabilize细胞膜,使溶解胆固醇,而不影响其结构提供抗原(gydF4y2Ba雅各et al ., 1991gydF4y2Ba)。然而,没有探索他们的角色在核酸交付报告。从先前的发现,包括我们自己的,在目前的研究中我们选择的糖苷配基部分甾族的皂角苷配基。二者的主要区别是:胆固醇有庚基链拴在甾体部分,而spiroacetal环代替皂角苷配基的烷基链存在。由于表面活性剂性质的皂角苷配基,他们可以与质膜,在促进更大的核酸可能提供帮助。为了更好地理解皂角苷配基在脂质体转染的影响,我们用不同的皂角苷配基制备脂质体作为co-lipid与我们之前确认transfection-efficient酰胺脂质,进一步增强细胞内的核酸和基因编辑效率。gydF4y2Ba

材料和方法gydF4y2Ba

隔离的质粒:gydF4y2BaeGFP质粒(绿色荧光蛋白报告基因编码)是DH5α-strain的放大gydF4y2Ba大肠杆菌。gydF4y2Ba质粒被隔离使用MaxiPrep方法与碱性溶解缓冲区,和纯度进行了分析gydF4y2Ba_{260年gydF4y2Ba}/一个gydF4y2Ba_{280年gydF4y2Ba}比率(1.9∼)使用NanoDrop 2000。1.5%琼脂糖凝胶电泳进行检查。gydF4y2Ba

脂质体的制备:gydF4y2Ba1毫米脂质体是准备使用先前建立协议(gydF4y2BaChandrashekhar et al ., 2011gydF4y2Ba)。总之,相关的脂质溶解在氯仿在玻璃小瓶和形成薄膜。他们干8 h,水化一夜之间,和probe-sonicated形成suv (gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

电动电势(ξ)和尺寸测量:gydF4y2Ba脂质体的大小和表面ζ电位测量Lite Sizer™500粒子分析仪(Anton洼地、奥地利)。分析了粒子的直径在Milli-Q DI水使用一个既定协议(gydF4y2BaMaddila et al ., 2021gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

诊断和信使rna的合成:gydF4y2Ba的化学base-modified eGFP和Cas9信使rna合成的酶进行了优化gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba如前所述转录(溶)协议(gydF4y2BaMahalingam et al ., 2022 agydF4y2Ba)。简而言之,eGFP和溶Cas9模板由PCR使用T7 promoter-containing引物。化学改性mrna转录从纯化溶模板与甲基取代UTP假尿苷5′三磷酸(me1Ψ-UTP) T7醋酸铵混合和净化转录RNA聚合酶反应的沉淀。后,盖一个是增加了5′末端和多聚腺苷酸尾约150基地3′末端的长度修改使用酶RNA,限制,和多聚腺苷酸跟踪方法。化学改性mrna纯化,用于转染实验。修改mRNA的净化是通过有机萃取和醋酸铵沉淀。简要修改mrna被TE-saturated分离溶反应混合酚/氯仿pH值8.0。mRNA-containing水上游阶段与5米后醋酸铵离心沉淀,离心沉淀信使rna是颗粒状的12000gydF4y2BaggydF4y2Ba15分钟在4°C,其次是与70%乙醇洗涤和re-suspending RNase-free水的颗粒。纯化信使rna是储存在-80或用于进一步的研究。gydF4y2Ba

转染试验:gydF4y2BaHEK 293 T细胞被播种密度24-well板每口井的50000个细胞的转染前12 - 18 h。0.5μg eGFP的质粒DNA无血清培养系统中不同脂质体包裹着媒体(总量100μL) 30分钟。脂质有基地(+ / -)1:1的比率。配合物被添加到细胞中。获得的转染概要文件在不同的日子里是相同的。在无血清的媒体(总量100μL) 30分钟,0.2μg eGFP信使rna信使rna转染不同脂质体包裹着。脂质有基地(+ / -)2:1的比率。配合物被添加到细胞中。gydF4y2Ba

内吞作用阻止:gydF4y2Ba使用成熟的协议(Endosomal拦截器进行了研究gydF4y2BaDharmalingam et al ., 2017gydF4y2Ba)。24-well板、50000 T HEK293细胞被播种和培养在37°C和5%的公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba24 h。30分钟的lipoplexes之前,细胞用蔗糖预处理(450海里),methyl-β-cyclodextrin(2毫米),dynasore(80μM),氯丙嗪(15μM)和制霉菌素(80μM)平原DMEM单独。媒介是取代DMEM含有青霉素−链霉素的边后卫10%和1%。lipoplexes被添加到细胞,细胞在37°C和5%孵化有限公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba。报告基因活动是使用流仪分析量化后48 h。gydF4y2Ba

胆固醇贩卖实验:gydF4y2BaHEK293T细胞被播种在50000细胞/ 24-well板。4 h后,丙咪嗪添加不同浓度的10、20、40μM并允许增长24 h。然后用AC 1:1和细胞治疗广告1:1 lipoplexes 4:1脂质:DNA收取比例。48小时后,细胞成像显微镜数字化。gydF4y2Ba

CRISPR / Cas9 pDNA转染:gydF4y2BaHEK293T细胞被播种密度50000细胞/在转染前24-well板12 - 18 h。0.5μg 4.7 kb eGFP-N1, 11.7 kb pL-CRISPR-EFS-GFP和13.7 kb pL-CRISPR-SFFV-GFP (pL-CRISPR-EFS-GFP和pL-CRISPR。SFFV。GFP的礼物是本杰明·艾伯特- Addgene质粒# 57827)[18],和lentiCRISPR-AAVS1 sgRNA构造(lentiCRISPR-AAVS1 sgRNA戴维•萨巴蒂——Addgene质粒的礼物# 70661)(19)浓缩了P3000 DNA-condensing代理,然后形成一个复杂的广告,AC和LF3000脂质体分别在普通DMEM / MEM培养基(总量100μL) 30分钟。脂质:DNA(+ / -)电荷比率为1:1广告和AC和1μL LF3000 24-well板块,规定。配合物被添加到细胞中。获得的转染概要文件在不同的日子里是相同的。gydF4y2Ba

Cas9信使rna转染:gydF4y2BaHEK 293细胞系,Cas9 mRNA的SCD轨迹sgRNA瞄准β-globin转染使用广告,交流,和商业控制。200 ng cas9信使rna用于脂质:信使rna(+ / -)的比例约为2:1,在室温下孵化15分钟。被添加到混合细胞。gydF4y2Ba

代cas9表达293 - t细胞系:gydF4y2BaHEK293 T细胞(4×10gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba)在six-well培养细胞培养板(康宁)。当细胞融合达到了80%,2.5μg lentiCRISPR V2 (Addgene # 52961)质粒转染使用Lipofectamine™3000试剂按制造商的协议。72 h post-transfection 2.5μg /毫升的嘌呤霉素抗生素选择添加到转染细胞。选择后,细胞系是维护1μg /毫升的嘌呤霉素获得稳定HEK 293 - t Cas9细胞系。gydF4y2Ba

我T7核酸内切酶(T7E1)分析:gydF4y2Ba48 h post-transfection,细胞在2000 rpm颗粒状5分钟。100µL量化宽松的DNA提取缓冲添加到小球,这是在65°C的环境为30分钟和15分钟的98°C。DNA被iQUANT量化nanodrop。检测编辑、AAVS1区域放大使用引物5′- TTCGGGTCACCTCTCACT和3′反向GGCTCCATCGTAAGCAAACC,和扩增子的大小是469个基点。同样,我们使用了正向和反向引物TAGCAATTTGTACTGATGGTATGG和3′逆转——GGAAAATAGACCAATAGGCAGAGAβ-globin轨迹,和扩增子的大小是496个基点。样本2%琼脂糖凝胶上运行100个基点梯子确认扩增子的大小。尊重目标区域放大后,PCR产品是变性和re-annealed允许heteroduplex形成。样本10单位T7酶酶处理20µL hetero-duplex样本,消化后,产生的裂解乐队被页面可视化。indel比例测量使用ImageJ软件。gydF4y2Ba

统计分析:gydF4y2Ba实验数据在每个图表示为获得值的平均数±标准差从每个实验,进行至少三次。从每一组实验数据与其他组相比在图表中使用学生学习任务。一个gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05被认为是显著的。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

筛选co-lipids皂角苷配基gydF4y2Ba

了解甾体皂角苷配基结合到脂质体的影响,首先,我们是物理化学性质,包括粒径、表面电位、和dna结合特性。水力直径的脂质体AC(酰胺:胆固醇),ASm(酰胺:菝葜配基)亚撒(酰胺:Sarsapogenin)被发现是类似150纳米的范围内±11日而略小广告(酰胺:薯蓣皂苷配基)和AY(酰胺:Yamogenin)发现在120 nm±8在动态光散射(DLS)研究(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba)。表面势的脂质体被发现是正的范围+ 25 + 40兆电子伏(gydF4y2Ba图1 cgydF4y2Ba)。DNA结合特性的脂质体很强的绑定即使在1:1脂质:DNA收取比(gydF4y2Ba补充图S1gydF4y2Ba)。进一步,我们评价DNA结合的强度与阴离子聚合物,肝素与肝素位移试验(gydF4y2Ba补充图S2gydF4y2Ba),和保护从DNase DNase-I敏感性试验(gydF4y2Ba补充图S3gydF4y2Ba)。两个实验证实,脂质体保护DNA免受外部的影响。总的来说,没有显著差异在脂质体的理化性质与胆固醇或其他皂角苷配基(gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

在体外gydF4y2Ba核酸转染gydF4y2Ba

首先,我们评估了脂质体的基因传递效率代表HEK293T(人类胚胎肾细胞)在脂质/ DNA收取1:1的比例使用eGFP N1质粒DNA作为报告基因编码绿色荧光蛋白,如前面描述的(gydF4y2BaDharmalingam et al ., 2017gydF4y2Ba)。广告,亚撒,AY显示几乎相似比例的GFP-positive细胞约85 - 90%,并显示20 - 30%相比优越转染AC脂质体(gydF4y2Ba图2 a, BgydF4y2Ba)。广告脂质体的转染效率是一样有效的商业转染试剂,Lipofectamine 3000 (gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

接下来,我们评估这些脂质体的转染效率提供线性核酸和mRNA在hek - 293 T使用GFP-encoding mRNA (gydF4y2Ba图2 c, DgydF4y2Ba)。sapogenin-doped脂质体中,广告、ASm和AY脂质体表明约20%的优势比AC脂质体转染。有趣的是,ASm脂质体显示2-fold-increased信使rna转染属性pDNA相比,转染(gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba)。发现了广告脂质体的转染效率,有效的商业转染试剂,如果信使Max (gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba)。我们还交流和广告脂质体的转染效率相比CHO细胞。类似的趋势也发生在HEK293T细胞(gydF4y2Ba补充图S4gydF4y2Ba)。广告脂质体展示优越mRNA在AC脂质体转染(gydF4y2Ba补充图S4gydF4y2Ba)。总的来说,甾族的皂角苷配基,尤其是diosgenin-doped广告脂质体,被认为是有效的在提供核酸,两圆pDNA和线性mRNA,有效商业控件。考虑到更广泛的可用性和更低的成本,我们进行进一步的薯蓣皂苷配基。gydF4y2Ba

评估lipoplex内吞作用gydF4y2Ba

在endosomal探针薯蓣皂苷配基的影响途径的广告lipoplexes胞内交货,我们与广告lipoplexes和细胞治疗比较cholesterol-doped AC lipoplexes (gydF4y2Ba图3一gydF4y2Ba),内吞作用抑制剂的存在。氯丙嗪,clathrin-mediated内吞作用抑制剂减少了50%的转染AC和广告lipoplexes (gydF4y2Ba图3一gydF4y2Ba)。小窝拦截器制霉菌素减少50%的转染的AC lipoplexes,而只有30%的转染与广告lipoplexes受到影响。Methyl-β-cyclodextrin (M-β-CD) cholesterol-depleting代理(gydF4y2BaIlangumaran Hoessli, 1998gydF4y2Ba),减少了lipoplexes转染到25%左右。(gydF4y2Ba图3一gydF4y2Ba)。与dynamin-dependent Dynosore通道阻滞剂,转染的AC lipoplexes减少了约70%,而在广告lipoplexes减少50%的转染。总的来说,转染与内吞作用的受体阻滞剂透露,内吞作用的广告lipoplexes较少依赖caveolae-mediated和dynamin AC lipoplexes。广告lipoplexes表现出比AC lipoplexes cholesterol-independent内化。gydF4y2Ba

评估胆固醇依赖lipoplexes的内吞作用gydF4y2Ba

进一步了解的影响质膜胆固醇lipoplexes的内吞作用,细胞与丙咪嗪预处理,可以抑制胆固醇的合成和贩运核内体和溶酶体向质膜和内质网。与丙咪嗪的浓度的增加,转染效率的AC lipoplexes减少成反比地;40µM浓度,AC lipoplexes的转染效率是减少到< 10%,而广告脂质体的转染效率没有明显的影响,甚至在40µM丙咪嗪。我们的研究结果支持假设广告内吞作用和胞内运输不太依赖胆固醇贩卖。(gydF4y2Ba图3 bgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

评估不同大小的CRISPR / Cas9质粒转染gydF4y2Ba

探讨广告脂质体的效率提供基因编辑系统,与11.7 kb pL-CRISPR我们评估其效率。EFS.GFP(一个ddgene #57818) and 13.7 kb pL-CRISPR. SFFV.GFP (Addgene #57827) plasmid constructs, which express both Cas9 and eGFP proteins driven through the EFS or SFFV promoter as a single transcript. (Heckl et al ., 2014gydF4y2Ba)。Cas9蛋白质表达量直接与eGFP的表达,作为单一记录生产Cas9和eGFP蛋白质,辅助裂解的P2A肽,肽键形成的工作通过核糖体跳过在终端P2A肽脯氨酸残基,导致个别多肽的生产。广告脂质体交付11.7 kb和13.7 kb CRISPR-GFP质粒和∼∼80%和60%比交流更有效的脂质体,分别为(gydF4y2Ba图4 b, CgydF4y2Ba)。广告脂质体可以提供更大的质粒商业控制LF3000一样有效。进一步的研究针对广告的结合使用脂质体与DNA-condensing代理等提供大尺寸质粒CRISPR质粒是必要的。广告脂质体展出成功交付各种核酸从1到13 kb在线性和环形结构。gydF4y2Ba

CRISPR / Cas9基因组编辑。gydF4y2Ba直接分析的效率diosgenin-doped脂质体在调解CRISPR / Cas9基因组编辑,我们转染HEK293 T细胞系14 kb一体化CRISPR质粒,既表达了Cas9 sgRNA。sgRNA目标AAVS1轨迹。广告脂质体显示优越indel效率达到69%,而15% AC脂质体,并与商用Lipofectamine可比gydF4y2Ba^®gydF4y2Ba3000年代在裂开AAVS1轨迹(54%的成功率gydF4y2Ba图5一个gydF4y2Ba)。这些结果与更大的赞同CRISPR pDNA转染。编辑实验Cas9交付pDNA令人信服地证明,利用薯蓣皂苷配基作为广告co-lipid脂质体提高编辑效率相比增加了两到三倍cholesterol-doped AC脂质体。gydF4y2Ba

越来越多的兴趣交付Cas9 mRNA形式gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba基因编辑。临床前模型的多方努力成功证明交付mRNA Cas9启用了脂质纳米粒子的形式gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba基因编辑(gydF4y2BaTabebordbar et al ., 2016gydF4y2Ba;gydF4y2Ba路德et al ., 2018gydF4y2Ba)。最近,交付Cas9 mRNA在脂质纳米颗粒显示成功的表型校正转体基因淀粉样变(hATTR) (gydF4y2BaTabebordbar et al ., 2016gydF4y2Ba)。为此,我们首先评估广告在提供化学合成sgRNA脂质体的效率。HEK293 T细胞稳定表达Cas9被转染sgRNA瞄准镰状细胞病的轨迹。的T7核酸内切酶分析显示更高水平的广告liposome-mediated比AC脂质体基因编辑在44.7%的细胞,介导镰状细胞轨迹编辑在40%的细胞(gydF4y2Ba图4 bgydF4y2Ba)。自从sgRNAs很小,大约120基地,编辑效率没有显著的差异在广告和AC脂质体。接下来,我们结合Cas9 mRNA和sgRNA瞄准了镰状细胞病轨迹。商业信使Max相比,广告indels有点低脂质体的比例,约40% vs 30%交付mRNA (gydF4y2Ba图4 cgydF4y2Ba)。然而,考虑到信使rna转染和广告的能力保护从酶促降解脂质体,广告脂质体可能是一个潜在的载体系统gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba编辑。总体而言,我们的研究表明,广告脂质体被发现是一个潜在的交付系统Cas9的质粒DNA和mRNA形式。gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba

在这项研究中,提供更大的质粒,包括CRISPR质粒,有效地进入细胞,我们筛选功能活性甾族的皂角苷配基作为替代co-lipid胆固醇。除了提供类似的函数作为胆固醇提供物理稳定脂质体,此外permeabilizes膜通过使溶解胆固醇存在于质膜而不影响其完整性(gydF4y2Ba雅各et al ., 1991gydF4y2Ba)。因此,我们选择屏幕甾体皂甙元提高核酸阳离子脂质体的转染。皂角苷配基类似于胆固醇附带spiro-acetal戒指甾族的根(gydF4y2BaParama et al ., 2020gydF4y2Ba)。从屏幕上皂角苷配基,我们表明,阳离子脂质体组成薯蓣皂苷配基表现出增强的转染效率在我们以前的脂质体配方酰胺胆固醇(AC)。薯蓣皂苷配基与yamogenin-doped脂质体粒径约120海里。这可能是由于表面活性剂性质影响脂质体的intra-lipid安排。sapogenin-doped脂质体的DNA结合特性被发现是类似于cholesterol-doped脂质体,这表明皂角苷配基并不影响核酸绑定属性。其他皂角苷配基,薯蓣皂苷配基被发现在传授核酸交付性能优越的脂质体。Sapogenin-doped广告脂质体可以提供更大的圆形质粒dna和线性比AC脂质体核酸分子(mRNA)。优越的胞内交付广告脂质体可以归因于他们增加cholesterol-independent内化。这可能是广告脂质体的转染优越的原因,正如clathrin-mediated内吞作用是优于clathrin-independent内吞作用(CIE)。我们从广告进一步证明了脂质体脂质体基因编辑工具包含CRISPR /有效地交付Cas9-encoded pDNA,信使rna,并增强基因编辑效率相比我们之前报道AC脂质体。 More importantly, we could demonstrate that by modulating the endocytic pathways of the lipoplexes by employing steroidal sapogenin in the cationic liposomes, the intracellular delivery of multiple biomolecules, including nucleic acids and proteins, could be enhanced. Overall, single transfection reagent AD liposomes were found to be as efficient in delivering plasmid DNAs as Lipofectamine 3,000 and Lipofectamine Messenger Max in delivering mRNAs.

结论gydF4y2Ba

总之,我们的研究结果共同表明,薯蓣皂苷配基可以用作co-lipid提高核酸转染和阳离子脂质体的基因编辑效率。这提供了一种有效的替代胆固醇在发展中脂质纳米粒配方为多个核酸交付的应用程序,包括核酸交付和基因编辑。gydF4y2Ba

数据可用性声明gydF4y2Ba

最初的贡献提出了研究中都包含在这篇文章/gydF4y2Ba补充材料gydF4y2Ba,进一步的调查可以直接到相应的作者。gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

SM:概念化、项目管理、监督资金收购和初稿写作,审查和编辑;SBT:概念化、项目管理、监督资金收购和初稿写作,审查和编辑;提单和DK:方法,gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba评价脂质体;AC:基因编辑实验和分析;PA和美联社:脂质体的制备方法和表征;VV和通用汽车:方法论、编辑细胞测序;PT和可:正式的分析,起草审查和编辑。gydF4y2Ba

资金gydF4y2Ba

女士收到财务部门的支持生物技术,印度项目的发展中脂质体基因编辑试剂(BT / PR25841 / / 119/162/2017)和圣收到金融支持生物技术的部门,印度项目的发展中造血干细胞和祖细胞的扩张的文化条件(BT / PR26901 /地中海/ 31/377/2017)。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

我们承认阿斯利瓦斯塔瓦,头,为他的支持和Sandhya CSCR-Vellore, CSCR核心设施成像和流式细胞仪实验。我们感谢r . Harikrishna Reddy和拉库马巴纳吉、应用生物学部门CSIR-Indian化学技术研究所Uppal路,Tarnaka,海德拉巴,500 007,TS,印度,帮助分析脂质体的理化数据。DK由于科学与工业研究理事会(CSIR),印度新德里的研究奖学金(08/0016 (15157)/ 2022 - emr我)。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Ba

本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。gydF4y2Ba

补充材料gydF4y2Ba

本文的补充材料在网上可以找到:gydF4y2Bahttps://www.雷竞技rebatfrontiersin.org/articles/10.3389/fbioe.2022.1031049/full补充材料gydF4y2Ba

引用gydF4y2Ba